[发明专利]临床前药物代谢动力学关键技术与研究体系在甲硫氨酸维b1的应用

权利要求书

1.临床前药物代谢动力学关键技术与研究体系在甲硫氨酸维b1的应用，其包 括：

(1)将一定浓度的甲硫氨酸维b1给予实验动物一定时间后，收集血液、尿液 和粪便中的一种或多种生物样品；

(2)将步骤(1)中获得的生物样品采用液液萃取、蛋白沉淀、固相萃取技术 进行处理，制成相应的溶液；

(3)采用液相色谱-质谱(LC-MS)、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析 步骤(2)中制备的溶液。

2.根据权利要求1所述的应用，其中，在步骤(2)中，所述液液萃取采用 乙酸乙酯和氨水的混合物以及乙酸乙酯和氢氧化钠的混合物，所述蛋白沉淀采用甲 醇沉淀、乙腈沉淀、甲醇和乙腈混合物沉淀。

3.根据权利要求1所述的应用，其中，在步骤(3)中，通过系统优化流动相 组成、流动相梯度流速、质谱离子化条件，以提高对甲硫氨酸维b1定量分析的灵敏 度。

4.根据权利要求3所述的应用，其中，甲硫氨酸维b1的最低检出限为纳克级。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的应用，其中，该应用还包括采用高效亲 和色谱法测定甲硫氨酸维b1在注射一定时间后与血浆蛋白的结合率。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的应用，其中，该应用还包括将一定浓度 的甲硫氨酸维b1处理Caco-2细胞，检测细胞形态、电阻值、甲硫氨酸维b1的通透 性和碱性磷酸酶活性，以检测甲硫氨酸维b1的透膜性和细胞吸收能力。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述的应用，其中，该应用还包括将一定浓度 的甲硫氨酸维b1处理整体动物、S9、人肝微粒体及单克隆纯化酶检测甲硫氨酸维 b1体外代谢稳定性及代谢产物的鉴定，通过结合LC-MS/MS，NMR技术，在定量 分析的基础上对该药物可能的I相及II相代谢产物进行了鉴定。

8.临床前药物代谢动力学关键技术与研究体系在甲硫氨酸维b1的应用，其包 括将一定浓度的甲硫氨酸维b1给予实验动物一定时间后，收集血液，采用高效亲和 色谱法测定甲硫氨酸维b1与血浆蛋白的结合率。

9.临床前药物代谢动力学关键技术与研究体系在甲硫氨酸维b1的应用，其包 括将一定浓度的甲硫氨酸维b1处理Caco-2细胞，检测细胞形态、电阻值、甲硫氨 酸维b1的通透性和碱性磷酸酶活性，以检测甲硫氨酸维b1的透膜性和细胞吸收能 力。

10.临床前药物代谢动力学关键技术与研究体系在甲硫氨酸维b1的应用，其包 括将一定浓度的甲硫氨酸维b1处理整体动物、S9、人肝微粒体及单克隆纯化酶， 检测甲硫氨酸维b1体外代谢稳定性及代谢产物的鉴定，通过结合LC-MS/MS，NMR 技术，在定量分析的基础上对该药物可能的I相及II相代谢产物进行了鉴定。