[发明专利]一种甘胆酸的测定试剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种甘胆酸的测定试剂及其制备方法，属于生化手段测试技术领域。

背景技术

血清甘胆酸(Cholyglycine,CG)是胆酸与甘氨酸结合而成的结合型胆酸之一，在 肝细胞内，胆固醇经过极其复杂的酶促反应，转变成初级胆汁酸。其中有胆酸(CA)和鹅去氧 胆酸(CD-CA)。胆酸的类固醇核上有三个羟基(C3、C7、C12)，侧链末端的羟基以肽键与甘氨 酸结合，分子量为462u。

CG在肝细胞合成，经胆管排入胆囊贮存，餐后胆囊收缩，随同胆汁排入小肠，参与 脂肪的消化吸收，95％的胆酸由小肠粘膜重吸收入血，经门静脉输送至肝脏由肝细胞摄取。 正常情况下，肝脏能有效摄取门静脉血中99％以上的CG重新泌入胆汁，仅有1％CG溢入体循 环。当肝细胞受损时，肝细胞不能有效摄取经肠肝循环达肝脏的CG，致使血中CG含量增高； 胆汁淤滞时，肝脏排泄胆酸发生障碍而返流入血循环中，也可使血中CG含量增高。

临床证明：肝损伤的生化指标中CG比谷丙转氨酶、胆红素等试验更敏感，具体如 下：

(1)在急性肝炎、慢性活动性肝炎、原发性肝癌、肝硬化及慢性迁延性肝炎等病症 中，其血清CG的水平均高于正常对照组，升高阳性率按上述顺序递减，尤其在临床鉴别慢性 活动性肝炎和慢性迁延性肝炎方面，慢活肝CG升高的幅度和频率均高于慢迁肝，CG可作为 一项有价值的指标，对判断慢性活动性肝炎的进展和缓解，预测疗效和复发均有很好价值。

(2)血清甘胆酸含量升高程度与肝硬化的病理发展进程呈正相关，是临床判断肝 硬化程度和预后的很好的指标。

(3)血清甘胆酸水平在胆结石患者显著升高，可高达50倍。

(4)梗阻性肝病时，CG水平增高10-20倍，药物性胆汁郁积症血清胆酸也增高。

(5)孕妇在怀孕的中后期，由于婴儿的增大，会压迫肝脏，使肝脏排泄胆酸发生障 碍而导致CG的偏高，严重者可能会导致死胎。

(6)妊娠期肝内胆汁淤积症(Intrahepaticcholestasisofpregnancy,ICP)又 称妊娠迟发性胆汁淤积,属高危妊娠之一。本病虽然无孕妇死亡,但对胎儿有严重影响,易 发生早产,胎儿宫内窘迫甚至围产儿死亡。

目前国内测定甘胆酸的方法主要有：

(1)乳胶增强免疫比浊法，该方法灵敏度较低，易出现前带现象。

(2)化学发光法，该方法虽然灵敏度高，但不稳定，重复性较差。

(3)酶联免疫法，该方法定量准确性差，操作时间长，自动化程度低，一般只用于定 性检测。

基于此，做出本申请。

发明内容

为了克服现有甘胆酸在测试过程中存在的上述缺陷，本发明首先提供一种快速灵 敏、准确性好、特异性高、稳定性好、操作简便，适用于临床全自动或半自动生化分析的甘胆 酸测定试剂。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种甘胆酸测定试剂，包括R1试剂、R2试剂和甘胆酸标准样，所述的R1试剂是由硫 代氧化型辅酶I溶解于添加有缓冲液的纯化水中所形成的溶液；所述的R2试剂是由还原型 辅酶I溶解于添加有缓冲液、甘胆酸脱氢酶、叠氮钠的纯化水中所形成的溶液；所述的甘胆 酸标准样是由甘胆酸钠水合物、缓冲液和叠氮钠溶解于纯化水中形成的溶液。

进一步的，作为优选：

所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液或三羟甲基氨基甲烷，更优选的，所述的磷酸盐缓 冲液的pH为7.0，浓度为0.65mol/L。

所述的硫代氧化型辅酶I为β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)，其 浓度为1g/L。

所述的还原型辅酶I为β-烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型(NADH)，其浓度为6g/L。

所述的甘胆酸脱氢酶浓度≥5000U/L。

所述的叠氮钠浓度为0.6mol/L。

同时，本发明还提供了一种具有上述特征甘胆酸测定试剂的制备方法，包括如下 步骤：

(1)R1试剂配制：向纯化水中加入缓冲液，搅拌至完全溶解；加入硫代氧化型辅酶I 搅拌至完全溶解，继续搅拌后定容；

(2)R2试剂配制：向纯化水中加入缓冲液，搅拌至完全溶解；加入甘胆酸脱氢酶，搅 拌至溶解；添加叠氮钠搅拌至溶解，加入还原型辅酶I搅拌至完全溶解，继续搅拌后定容；