[发明专利]一种结直肠癌检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种结直肠癌检测试剂盒，尤其涉及一种以粪便为检测样本的简易的结直肠癌检测试剂盒。

背景技术

目前在结直肠癌筛查上主要有两种常用技术。

一种是大便隐血试验。通常肠癌的发生演变在早期可以没有任何征兆，癌细胞可在大肠肠壁上生长数十年再转移到其他部位，在没有任何症状前，增生的组织可渗出少量血液，血液进入大便被排出。而大便隐血试验就是检测大便中的血液成分(检测对象是血红蛋白)，若多次、持续的阳性反应提示消化道出血，应做进一步检查以警惕肠道肿瘤的发生。该法的优点是结果显示快、清晰，结果可以半定量。但其存在一系列缺点：首先，其特异性差，受饮食影响大。含亚铁离子的食物和药物对结果有干扰，假阳性率30％。隐血检查前，指导患者应避免服用铁剂、动物血、肝类、瘦肉以及大量绿叶蔬菜3天，如有牙龈出血，误咽下血性唾液，以防粪便隐血检查呈假阳性；其次，其敏感度低，出血量>90μg/ml才能检出；再次，该方法学限制条件多：患者提前准备时间长，由于取材部位不同，反应时间不同，对显色的判断不同，故在同一方法的试验中，也可产生误差，因此一般测试时候均要求患者采用不同天的粪便样品连续测定。

另一种方法是肠镜检查。目前肠镜检查对于肠内病变诊断而言，是最有效可靠的诊断方法。绝大多数早期肠癌患者可由内镜检查发现并确诊。它通过肛门插入可检查到直肠、乙状结肠、降结肠、横结肠、升结肠和盲肠以及与大肠相连的一小段小肠(回盲末端)。通过镜子不但可以清楚地发现肠道病变，还可对部分肠道病变进行治疗，如：大肠息肉等良性病变镜下直接摘除，对肠道出血进行镜下止血，对大肠内异物进行清除。肠镜检查技术是目前其它诊疗手段无法替代的主要手段。目前肠镜检查对于肠内病变诊断而言，是最有效可靠的诊断方法。然而，其也存在一系列的缺点：首先，其需要检查前准备，作肠镜需要在检查前3天开始进食流质或少渣半流质饮食，检查当天上午空腹，检查前一天开始服用甘露醇等导泻剂清洁肠道，服用的液体量通常高达2L，清洁灌肠以保证肠道的清洁度，之后不能再进食。检查时医生会通过肠镜向肠腔内注入一定量气体使肠道膨大便于观察。由于结肠结构迂回曲折，检查过程中被检查者会有不同程度的胀痛或牵拉感觉。对于过分紧张或高度肠痉挛的受检者，则需要使用镇静剂或解痉药物。对于不能配合的小儿，则需要在麻醉下进行。其次，其对医生的操作熟练水平有很高的要求，初学者容易在肠镜下遗漏病变部位造成漏诊。由于检查过程中需要注入气体，会使肠内压力增大，易引起穿孔。再次，病人在检查过程中费力，费时，有一定的痛苦。并且检查费用高，较难大规模推广。

除了上述两种方法之外，分子诊断方法是近年来发展迅速的癌症诊断方法。目前已报道的(伍勇等)结直肠癌分子诊断法中，有采用粪便DNA检测并结合FOBT联合诊断的方法，该方法需要首先对粪便中的DNA进行提取，再检测标记物APC、K-ras、p53。

粪便是人或动物的食物残渣排泄物。粪便的四分之一是水分，其余大多是蛋白质、无机物、脂肪、未消化的食物纤维、脱了水的消化液残余、以及从肠道脱落的细胞和死掉的细菌，还有维生素K、维生素B、粪胆色素和尿胆素。正常情况下人的消化道上皮也会脱落一些细胞，这些正常方式脱落的细胞进行程序性坏死，使其细胞中含有的核酸自然降解掉，所以在正常人的粪便中基本检测不到人的核酸。但是当消化道出现病变，或者发生癌变时，消化道内会有大量的体细胞或者癌细胞，非正常脱落。这些细胞不会启动程序性坏死程序，其细胞内的核酸不会自发的降解掉。这些脱落的细胞随着肠道内容物向下游运动，并在肠道菌群的作用下细胞被破坏，其中的核酸释放出来被降解成短的片段DNA。这些短片段的人的DNA和肠道内的数以亿计的细菌以及食物残渣和代谢产物混合在一起形成粪便被排除体外。消化道的病变越严重或者是消化道肿物体积越大和肿瘤性质越恶变，肠道内混入的人的核酸就越多。