[发明专利]添加稳定剂的生物基质的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物分析领域，特别是涉及添加稳定剂的生物基质的制备方法。

背景技术

样品前处理在生物样品分析中占重要地位，其中一个主要问题就是待测物在基质中的稳定性。国际上很多生物分析专业组织及权威机构，如FDA等都对待测物在生物样品中的稳定性问题进行了深入探讨。影响待测物稳定性的因素主要是生物样品中的酶、抗凝剂、环境温度、pH值、光强度、含氧量等。保证待测物稳定性是准确定量分析的先决条件，因此采取相应处理措施以确保待测物在生物基质中稳定，从而得到可靠的测定结果是极其必要的。

血浆、血清等生物样品中常有酶降解、氧化等因素导致的待测物不稳定问题。为防止待测物采样后降解，保证测定准确性，通常会使用有机试剂或其他特殊稳定剂溶液，在血液采集时同抗凝剂一起加入或采样前加入抗凝采血管。尽管在生物分析方法开发阶段，稳定剂的种类、用量以及加入时间等条件可以得到很好的优化并最终确定，但在实际采样过程中可能由于采样量比预计稍大、细节操作不当(如稳定剂聚成液滴沉于管底等)，使得稳定剂不能和基质充分混合，甚至产生溶血等而无法得到理想的稳定待测物的效果。

由于稳定剂的特殊性和多样性，市售只有普通的添加剂，而生物分析需要为每个药物开发特殊方法。掌握稳定剂的添加方法，制备标准化和高质量的含添加剂生物基质，才能保证生物分析方法开发的有效性，及方法验证和样品分析的有效进行，保证基于该生物基质开发出来的生物分析方法能满足CFDA、FDA、OECD的要求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种添加稳定剂的生物基质的制备方法，它可以提高稳定剂在基质中的分散程度，提高含稳定剂的生物基质的质量。

为解决上述技术问题，本发明的添加稳定剂的生物基质的制备方法，步骤包括：

1)筛选能够有效稳定生物基质中不稳定的待测物的稳定剂；

2)选择既能有效溶解所述稳定剂，又能避免溶血的溶媒；

3)筛选稳定剂能稳定待测物的最低添加量；

4)选择体积比待加入的稳定剂溶液体积大且不光滑的制备管；

5)将稳定剂溶液加入到制备管中，振荡，使稳定剂均匀分散在管壁上；

6)将生物基质加入到制备管中，充分混合。

上述步骤1)，所述稳定剂可以是蛋白酶抑制剂、苯甲基磺酰氟、维生素C、乙腈或其他有机稳定剂。

上述步骤2)，所述溶媒可以是水、有机溶剂或它们的混合溶液。

上述步骤3)，最低添加量为10.0微升至若干毫升，视具体情况定。

上述步骤4)，制备管的体积约为稳定剂溶液体积的2-10倍。制备管的材质可以是聚丙烯管。

上述步骤5)，稳定剂溶液的加入量为10.0微升至若干毫升，视具体情况定。

上述步骤6)，混合时，用适中的力度震荡制备管，将管中溶液均匀分散于管壁或匀速涡旋。震荡可以是手动震荡，也可以借助震荡仪器。

本发明通过改进添加稳定剂的处理细节，制备出了质量优异、均一性好的含稳定剂的特殊生物基质，不仅提高了稳定剂对生物基质中不稳定待测物的稳定效果，而且有效避免了溶血等不利情况的发生，从而可以提高生物分析方法的稳定性和可靠性，更好的满足法规依从性。

附图说明

图1是用不同方法制备的含特殊稳定剂(PMSF)的生物基质的质量对比图。其中，a图为使用常规方法加入稳定剂制备得到的溶血生物基质，b图为使用本发明的方法加入稳定剂制备得到的高质量生物基质。

图2是用不同方法制备含乙腈上清液的生物基质的结果对比图。其中，a图为使用常规方法制备乙腈上清液生物基质出现结块现象，b图为使用本发明的方法制备出分散度高的乙腈上清液生物基质。

具体实施方式

为对本发明的技术内容、特点与功效有更具体的了解，现结合具体实施例，对本发明详述如下：

本实施例的添加乙腈稳定剂的生物基质的制备方法，主要包括以下步骤：

步骤1，对于全血稳定性极差的某化合物，通过筛选获得有效的稳定剂乙腈，该乙腈稳定剂能有效稳定生物基质中的待测化合物。

步骤2，针对步骤1删选出来的有效稳定剂，制备纯乙腈上清液。该乙腈上清液既能满足有效溶解，又能充当良好的分散剂，帮助溶液分散，以减少溶血等现象。

步骤3，筛选稳定剂的有效添加比例。本实施例按照全血与乙腈上清液体积比1:2.5来添加稳定剂，稳定待测化合物。