[发明专利]一种青霉素G钠表面分子印迹聚合物的制备方法及其应用在审
申请号: | 201510934634.9 | 申请日: | 2015-12-15 |
公开(公告)号: | CN105384872A | 公开(公告)日: | 2016-03-09 |
发明(设计)人: | 刘宏程;沈报春;杨倩 | 申请(专利权)人: | 云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所 |
主分类号: | C08F222/14 | 分类号: | C08F222/14;C08F220/06;C08J9/26;B01J20/26;B01J20/30 |
代理公司: | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人: | 董芙蓉 |
地址: | 650223 云南省*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 青霉素 表面 分子 印迹 聚合物 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种青霉素G钠表面分子印迹聚合物的制备方法,其特征在于:将青霉素G钠溶于一定的溶液,所述一定的溶剂为二甲基亚砜(DMSO)和甲醇体积比为4:1的混合物;然后,加入功能单体搅拌,再加入交联剂、引发剂,氮气除氧,加热反应;反应结束后洗去模板分子青霉素G钠,干燥,即得青霉素G钠表面分子印迹聚合物。
2.根据权利要求1所述的一种青霉素G钠表面分子印迹聚合物的制备方法,其特征在于:所述功能单体为α-甲基丙烯酸(MAA)。
3.根据权利要求1所述的一种青霉素G钠表面分子印迹聚合物的制备方法,其特征在于:所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)。
4.根据权利要求1所述的一种青霉素G钠表面分子印迹聚合物的制备方法,其特征在于:所述引发剂为偶氮二异丁腈(AIBN)。
5.根据权利要求1所述的一种青霉素G钠表面分子印迹聚合物的制备方法,其特征在于:所述青霉素G钠表面分子印迹聚合物能检测牛奶中一定范围内的青霉素G钠残留。
6.青霉素G钠表面分子印迹聚合物的性能研究实验方法:其特征在于:包括以下步骤:
a、青霉素G钠标准溶液的配制:
将青霉素G钠溶于一定的溶液,配制成不同浓度的青霉素G钠标准溶液。
作为优选,所述溶剂采用甲醇溶剂。
b、标准曲线的绘制:
将不同浓度的青霉素G钠溶液,于264nm波长下,以不含青霉素G钠溶液的甲醇溶液为空白对照,分别测定吸光度。以吸光度为纵坐标,青霉素溶液的浓度为横坐标,绘制标准曲线。
c、结合动力学实验:
分别称取MIP和NIP,加入青霉素G钠溶液,室温下振荡,24h内取出混合液离心,取上清液用紫外分光光度计测定其吸光度,根据标准曲线计算不同吸附时间青霉素G钠的浓度。计算聚合物对青霉素G钠的结合量Q(μg/mg)。
Q=(Co-C1)·V/m
其中C0、C1分别表示吸附前后溶液中模板分子的浓度(μg/mL);V表示溶液的体积(mL);m表示加入的分子印迹聚合物的质量(mg)。绘制结合量与结合时间关系的动力学曲线。确定分子印迹聚合物的结合量Q、印迹因子α和最佳结合平衡时间。
α=Q(MIP)/Q(NIP)
其中Q(MIP)表示分子印迹聚合物的饱和结合量;Q(NIP)表示非分子印迹聚合物的饱和结合量。印迹因子α的大小代表了MIP的特异吸附性质,其数值越大,特异性越好,印迹效果就越强。
d、吸附等温曲线:
称取MIP,置于离心管中,不同浓度的青霉素G钠溶液。室温下振荡20h达到吸附平衡后,将混合液离心,取上清液测定吸光度,计算分子印迹聚合物饱和结合量Q,绘制吸附等温线。
e、特异性识别实验:
选取青霉素V钾、阿莫西林、头孢地尼、头孢克肟、头孢拉定、盐酸左氧氟沙星作为目标分子。分别称取MIP和NIP,置于试管中,加入青霉素G钠溶液。室温下振荡达到吸附平衡后,将各混合液离心,取上清液,测定吸光度,依据标准曲线计算结合前后溶液浓度的变化。采用选择因子(SelectinGFactor,β)来描述MIP的选择识别能力,计算出模板印迹因子α1和模板类似物的印迹因子α2,根据公式计算选择因子β:
β=α1/α2
选择因子β的大小代表了MIP对模板类似物的选择分离能力,β数值越大,越容易使模板分子和模板类似物分离开。
7.青霉素G钠表面分子印迹聚合物检测牛奶中一定范围内的青霉素G钠残留的方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)牛奶样品的提取:
取牛奶样品置于离心管中,加入提取溶剂混匀,离心,重复上述操作,合并提取液,加入另一种提取溶液,调节pH,加热搅拌,得提取后的牛奶。
作为优选,所述提取溶剂为乙腈。
作为优选所述提取溶液为磷酸盐缓冲溶液(pH)。
(2)方法学验证:
a、准确度与批内精密度:
将牛奶样品均分到9支离心管中并标记,分别向其中加入青霉素G钠的标准溶液混匀,在溶液中分别加入准确称重的分子印迹聚合物,在室温下震荡达到吸附平衡后,将溶液离心。过滤,干燥,称重。根据聚合物前后质量差,计算回收率和相对标准偏差RSD。
回收率(%)=测得量/加入量×100%
b、检测限LOD:
用空白样品即不加牛奶样品的青霉素G钠,按方法学验证中准确度和批内精密度的方法计算标准偏差SD,再将3倍空白的SD作为检测限的估算值。
LOD=3S(S为空白样品的标准偏差)
(3)牛奶样品的测定:
离心管中加入分子印迹聚合物MIP,加入提取后的牛奶样品,室温震荡,离心,过滤,干燥,称重,计算青霉素G钠的含量。
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