[发明专利]一种青霉素G钠表面分子印迹聚合物的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种青霉素G钠表面分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于：将青霉素G钠溶于一定的溶液，所述一定的溶剂为二甲基亚砜(DMSO)和甲醇体积比为4:1的混合物；然后，加入功能单体搅拌，再加入交联剂、引发剂，氮气除氧，加热反应；反应结束后洗去模板分子青霉素G钠，干燥，即得青霉素G钠表面分子印迹聚合物。

2.根据权利要求1所述的一种青霉素G钠表面分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于：所述功能单体为α-甲基丙烯酸(MAA)。

3.根据权利要求1所述的一种青霉素G钠表面分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于：所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)。

4.根据权利要求1所述的一种青霉素G钠表面分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于：所述引发剂为偶氮二异丁腈(AIBN)。

5.根据权利要求1所述的一种青霉素G钠表面分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于：所述青霉素G钠表面分子印迹聚合物能检测牛奶中一定范围内的青霉素G钠残留。

6.青霉素G钠表面分子印迹聚合物的性能研究实验方法：其特征在于：包括以下步骤：

a、青霉素G钠标准溶液的配制：

将青霉素G钠溶于一定的溶液，配制成不同浓度的青霉素G钠标准溶液。

作为优选，所述溶剂采用甲醇溶剂。

b、标准曲线的绘制：

将不同浓度的青霉素G钠溶液，于264nm波长下，以不含青霉素G钠溶液的甲醇溶液为空白对照，分别测定吸光度。以吸光度为纵坐标，青霉素溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。

c、结合动力学实验：

分别称取MIP和NIP，加入青霉素G钠溶液，室温下振荡，24h内取出混合液离心，取上清液用紫外分光光度计测定其吸光度，根据标准曲线计算不同吸附时间青霉素G钠的浓度。计算聚合物对青霉素G钠的结合量Q(μg/mg)。

Q＝(C_o-C₁)·V/m

其中C₀、C₁分别表示吸附前后溶液中模板分子的浓度(μg/mL)；V表示溶液的体积(mL)；m表示加入的分子印迹聚合物的质量(mg)。绘制结合量与结合时间关系的动力学曲线。确定分子印迹聚合物的结合量Q、印迹因子α和最佳结合平衡时间。

α＝Q(MIP)/Q(NIP)

其中Q(MIP)表示分子印迹聚合物的饱和结合量；Q(NIP)表示非分子印迹聚合物的饱和结合量。印迹因子α的大小代表了MIP的特异吸附性质，其数值越大，特异性越好，印迹效果就越强。

d、吸附等温曲线：

称取MIP，置于离心管中，不同浓度的青霉素G钠溶液。室温下振荡20h达到吸附平衡后，将混合液离心，取上清液测定吸光度，计算分子印迹聚合物饱和结合量Q，绘制吸附等温线。

e、特异性识别实验：

选取青霉素V钾、阿莫西林、头孢地尼、头孢克肟、头孢拉定、盐酸左氧氟沙星作为目标分子。分别称取MIP和NIP，置于试管中，加入青霉素G钠溶液。室温下振荡达到吸附平衡后，将各混合液离心，取上清液，测定吸光度，依据标准曲线计算结合前后溶液浓度的变化。采用选择因子(SelectinGFactor，β)来描述MIP的选择识别能力，计算出模板印迹因子α₁和模板类似物的印迹因子α₂，根据公式计算选择因子β：

β＝α₁/α₂

选择因子β的大小代表了MIP对模板类似物的选择分离能力，β数值越大，越容易使模板分子和模板类似物分离开。

7.青霉素G钠表面分子印迹聚合物检测牛奶中一定范围内的青霉素G钠残留的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)牛奶样品的提取：

取牛奶样品置于离心管中，加入提取溶剂混匀，离心，重复上述操作，合并提取液，加入另一种提取溶液，调节pH，加热搅拌，得提取后的牛奶。

作为优选，所述提取溶剂为乙腈。

作为优选所述提取溶液为磷酸盐缓冲溶液(pH)。

(2)方法学验证：

a、准确度与批内精密度：

将牛奶样品均分到9支离心管中并标记，分别向其中加入青霉素G钠的标准溶液混匀，在溶液中分别加入准确称重的分子印迹聚合物，在室温下震荡达到吸附平衡后，将溶液离心。过滤，干燥，称重。根据聚合物前后质量差，计算回收率和相对标准偏差RSD。

回收率(％)＝测得量/加入量×100％

b、检测限LOD：

用空白样品即不加牛奶样品的青霉素G钠,按方法学验证中准确度和批内精密度的方法计算标准偏差SD，再将3倍空白的SD作为检测限的估算值。

LOD＝3S(S为空白样品的标准偏差)

(3)牛奶样品的测定：

离心管中加入分子印迹聚合物MIP，加入提取后的牛奶样品，室温震荡，离心，过滤，干燥，称重，计算青霉素G钠的含量。