[发明专利]一种在体外研究昆虫卵巢吸收外来微粒的方法

说明书

本发明公开了一种在体外研究昆虫卵巢吸收外来微粒的方法。该方法首先解剖虫体获得卵巢，置于细胞培养基中，之后在上述培养基中加入外来微粒，进行外来微粒和昆虫卵巢的共培养，最后在显微镜下观察外来微粒进入昆虫卵巢的情况。利用本方法，可以研究昆虫卵巢吸收外来微粒的位置特异性；并可将外来微粒作为共生菌的对照，从而为在体外研究昆虫共生菌经卵垂直传播机制提供实验对照。

技术领域

本发明涉及昆虫生理生化研究的技术领域，尤其涉及昆虫卵巢的生理生化研究领域。

背景技术

昆虫是自然界种类最多的动物，与人类的生产活动和身体健康密切相关。研究昆虫的生理生化特征是利用或控制昆虫的基础。在一些昆虫中，特别是以刺吸式口器吸食植物汁液的半翅目昆虫中，存在一些与其生存与发育密切相关的共生菌，这些共生菌存在于昆虫的脂肪体中，为宿主提供水稻汁液中所稀缺的一些必需氨基酸等营养物质，失去这些共生菌，昆虫将不能存活。如在褐飞虱中，就存在大量的类酵母共生菌为褐飞虱提供组氨酸、精氨酸等必需氨基酸。稻飞虱、蚜虫、叶蝉等半翅目昆虫，多是农林重要害虫。因此，研究半翅目昆虫与其共生菌的关系有着非常重要的意义。上述这类共生菌在半翅目昆虫中通过宿主的卵巢-卵母细胞这种经卵垂直传播方式从母代传到子代，而这些共生菌进入卵巢的位置是在卵巢小管的上皮栓处，说明卵巢小管的上皮栓对吸收共生菌可能有着位置的独特性，但是这个独特性是否对吸收任何外来微粒都具有普遍性却是未知。此外，研究共生菌进入昆虫卵巢也缺乏对照物，这也阻碍了对昆虫共生菌经卵垂直传播机制的研究。

发明内容

本发明的目的在于针对现有研究技术的不足，提供一种在体外研究昆虫卵巢吸收外来微粒的方法。

本发明目的是通过以下技术方案得以实现的。

一种在体外研究昆虫卵巢吸收外来微粒的方法，按以下操作步骤进行：

（1）昆虫准备：制备1× PBS，其为1×磷酸盐缓冲液，pH = 6.4。用75%酒精对性成熟的雌成虫表面消毒5分钟后，再用无菌1× PBS清洗3遍，备用；

（2）离体卵巢的获得：取步骤（1）的成虫，置于无菌的1× PBS中，用消毒过的显微解剖镊小心剖开虫体腹部，在尽量不破坏虫体肠道的情况下，获得卵巢，并用1×PBS清洗卵巢，之后将卵巢置于含有昆虫培养基的培养皿中；

（3）外来微粒与卵巢共培养：将微米级的外来微粒加入到步骤（2）所述的含有卵巢的培养皿中，进行外来微粒与卵巢的共培养，培养温度为27℃，同时，以50转/分钟的速度旋转培养皿；

（4）观察：外来微粒与卵巢共培养1天后，在倒置显微镜下，观察外来微粒进入卵巢的情况。

以上（1）至（3）步骤中解剖、加样、取样等操作均在超净工作台内无菌操作完成。

本发明的有益效果是：利用本方法，可以研究昆虫卵巢吸收外来微粒的位置特异性；也可将外来微粒作为共生菌的对照，从而为在体外研究昆虫共生菌经卵垂直传播机制提供实验对照。

具体实施方式

以下实施例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权利要求的保护范围内，对本发明作出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。

实施例：在体外研究褐飞虱卵巢吸收红色荧光颗粒的方法

该方法按以下步骤进行：

（1）昆虫准备：制备1× PBS，其为1×磷酸盐缓冲液，pH = 6.4。用75%酒精对性成熟的雌成虫表面消毒5分钟后，再用无菌1× PBS清洗3遍，备用；