[发明专利]心肌标志物的联合检测装置及其制备方法

权利要求书

1.一种心肌标志物的联合检测装置的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

（a）采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；

（b）采用步骤（a）中制得的胶体金标记MPO、cTnI和NT-proBNP抗体，获得免疫胶体金；

（c）采用喷金缓冲液稀释步骤（b）的免疫胶体金获得免疫胶体金溶液，用免疫胶体金溶液喷涂于玻璃纤维垫，制得免疫胶体金玻璃纤维膜；

（d）将硝酸纤维素膜用多聚赖氨酸处理液预处理后，喷点与二氧化硅纳米颗粒结合的MPO、cTnI和NT-proBNP抗体作为检测线，喷点羊抗鼠IgG抗体作为质控线，制得免疫硝酸纤维素膜；

所述的将硝酸纤维素膜用多聚赖氨酸处理液预处理是：用多聚赖氨酸处理液浸泡硝酸纤维素膜1 h，并慢速振荡摇晃，取出后用蒸馏水清洗3遍，最后在真空干燥箱中干燥；

所述的二氧化硅纳米颗粒结合的MPO、cTnI和NT-proBNP抗体是：以二氧化硅作为载体，分别取1 mL MPO、cTnI和NT-proBNP抗体溶液，与乙醇和去离子水搅拌混匀，再加入定量氨水和0.3 mL正硅酸已酯，搅拌1小时后，补加剩余正硅酸已酯，持续搅拌，整个反应避光进行，分别以12000 rpm，8500 rpm和7000 rpm离心10分钟收集，无水乙醇、去离子水各洗2遍；

所述的二氧化硅纳米颗粒制备方法：将2.48 mL体积分数25的氨水和43.2 mL无水乙醇混合于锥形瓶中，在35℃和超声条件下，以0.4 mL/min的速度滴入3.5 mL正硅酸乙酯，滴完后再超声3分钟，即可制得粒径120 nm均一的粒子，分别以12000 rpm，8500 rpm和7000 rpm离心10分钟收集，倒掉上清液，再加水超声分散，反复多次洗涤至近中性，最后用水定容至体积与刚制备好时的体积相同，存放待用；

（e）将预处理的样品垫、步骤（c）制备的免疫胶体金玻璃纤维膜、步骤（d）制备的免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条装入塑料外壳。

2.根据权利要求1所述的心肌标志物的联合检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（a）所述的采用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金颗粒粒径为20~60nm。

3.根据权利要求1所述的心肌标志物的联合检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（a）所述的喷金缓冲液由Tris-HCL液、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白BSA组成，pH值8.5，其中Tris-Hcl浓度为0.02mol/L，蔗糖浓度为5~20%，海藻糖浓度为1~5%，牛血清白蛋白BSA浓度为0.5~1% 。

4.根据权利要求1所述的心肌标志物的联合检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（e）所述的预处理的样品垫采用的样品垫处理液由Tris-HCL液、牛血清白蛋白BSA、酪蛋白、表面活性剂烷基酚聚氧乙烯醚组成，其中Tris-HCL液浓度为0.1mol/L，牛血清白蛋白BSA浓度为0.5~1%，酪蛋白浓度为0.1~0.2%、表面活性剂烷基酚聚氧乙烯醚浓度为0.5~1%。

5.根据权利要求1所述的心肌标志物的联合检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（d）所述的多聚赖氨酸处理液由多聚赖氨酸稀释到浓度为0.5%组成，经0.22μm滤膜过滤，其中多聚赖氨酸，SIGMA,150KD～300KD，备用。

6.根据权利要求1所述的心肌标志物的联合检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（d）所述的多聚赖氨酸处理液由多聚赖氨酸与甲醇混合组成，其中多聚赖氨酸浓度为0.5%组成，甲醇浓度为5%，经0.22μm滤膜过滤，其中多聚赖氨酸，SIGMA,150KD～300KD，备用。

7.根据权利要求1所述的心肌标志物的联合检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（d）所述的多聚赖氨酸处理液由多聚赖氨酸、甲醇、PEG20000混合组成，其中多聚赖氨酸浓度为0.5%组成，甲醇浓度为5%，PEG20000浓度为0.1%，经0.22μm滤膜过滤，其中多聚赖氨酸，SIGMA,150KD～300KD，备用。