[发明专利]一种衰老控制microRNA530基因及其转基因植物和应用

权利要求书

1.衰老控制microRNA530前体基因在培育延缓衰老的转基因水稻中的应用，所述衰老控制microRNA530前体基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述延缓衰老的转基因植物的制备方法，包括如下步骤：

(1)获得衰老控制microRNA530前体基因的核苷酸序列；

(2)用RT-PCR获得衰老控制microRNA530前体基因片段；

(3)构建衰老控制microRNA530前体基因的植株过量表达载体；

(4)将步骤(3)得到的植株过量表达载体转化农杆菌；

(5)将带有转化植株过量表达载体的农杆菌转化水稻品种日本晴。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：

在步骤(1)中，通过网站找到衰老控制microRNA530前体基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示；

在步骤(2)中，利用PCR的方法扩增出衰老控制microRNA530前体基因的核苷酸序列；

所述引物包括上游引物和下游引物；所述带有BamH1酶切位点的上游引物具有SEQ IDNO：3的核苷酸序列，所述带有Spe1酶切位点的下游引物具有SEQ ID NO：4的核苷酸序列；

以反转录得到的水稻日本晴幼叶cDNA为模板，利用上述引物在Takara Ex Taq的作用下扩增目的片段，PCR反应条件是94℃预变性3分钟；94℃1分钟，54℃30秒，72℃20秒，30个循环，72℃后延伸10分钟；

将扩增产物回收纯化后，连接到pMDl9-T Simple载体，筛选阳性克隆并测序，获得所需衰老控制microRNA530基因片段；

在步骤(3)中，得到的阳性克隆pMDl9-osa-miR530cDNA用BamHⅠ和SpeⅠ双酶切，回收插入片段；并用同样的方法酶切pCAMBIA1390-ubi的植物表达载体，回收载体片段；用回收的插入片段和载体片段做连接反应，转化大肠杆菌DH5α，通过酶切筛选阳性克隆，获得植株过量表达载体，载体命名为pCAMBIA1390-ubi-osa-miR530；

在步骤(4)中，将pCAMBIA1390-ubi-osa-miR530植株过量表达载体转化至根癌农杆菌EHA105菌株中；

在步骤(5)中，通过农杆菌介导的目标植物遗传转化体系将其导入到水稻品种日本晴中，经过预培养、侵染、共培养、筛选具有潮霉素抗性的愈伤、分化、生根、移苗，获得延缓衰老的osa-miR530转基因植物。