[发明专利]一种快速检测桑尼短体线虫的环等温扩增引物及其应用在审
| 申请号： | 201510940048.5 | 申请日： | 2015-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN105349687A | 公开（公告）日： | 2016-02-24 |
| 发明（设计）人： | 林康艺 | 申请（专利权）人： | 林康艺 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 林伟斌 |
| 地址： | 528253 广东省佛山市南*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 检测 桑尼短体 线虫 等温 扩增 引物 及其 应用 | ||
1.一种快速检测桑尼短体线虫的环等温扩增引物组，其特征在于，包括外侧引物ptF31/ptB31和内侧引物ptFIP1/ptBIP1；引物ptF31的序列如SEQIDNO.1所示，引物ptB31的序列如SEQIDNO.2所示，引物ptFIP1的序列如SEQIDNO.3所示，引物ptBIP1的序列如SEQIDNO.4所示。
2.权利要求1所述环等温扩增引物组在检测桑尼短体线虫方面的应用。
3.权利要求1所述环等温扩增引物组在制备检测桑尼短体线虫的试剂或试剂盒方面的应用。
4.一种快速检测桑尼短体线虫的环等温扩增方法，其特征在于，该方法是以样品DNA为模板，利用权利要求1所述外侧引物对ptF31/ptB31和内侧引物对ptFIP1/ptBIP1进行环介导等温扩增反应。
5.根据权利要求4所述环等温扩增方法，其特征在于，所述环介导等温扩增反应结果的判定方法为：将扩增产物进行凝胶电泳，如果出现特异性阶梯状条带，则判定样品中含有桑尼短体线虫DNA，即为桑尼短体线虫阳性；
或者向扩增产物中加入SYBRgreenI或钙黄绿素，如果扩增产物由橘红色变为浅绿色，则判定样品中含有桑尼短体线虫DNA，即为桑尼短体线虫阳性。
6.根据权利要求4所述环等温扩增方法，其特征在于，所述环等温扩增方法的反应体系为：1μLDNA，引物ptFIP1和ptBIP1各1.6μM，引物ptF31和ptB31各0.2μM，dNTP0.35μM，2.5μL10×BST2.0DNA聚合酶缓冲液，0.8M甜菜碱，1.5μLMgSO4(100mM)，1μLBST2.0DNA聚合酶，余量ddH2O补足，共25μL。
7.根据权利要求4所述环等温扩增方法，其特征在于，所述环等温扩增方法的反应条件为：65℃反应60min。
8.一种快速检测桑尼短体线虫的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述外侧引物对ptF31/ptB31和内侧引物对ptFIP1/ptBIP1。
9.根据权利要求8所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒所使用的检测方法为权利要求4所述环等温扩增方法。
10.权利要求4所述环等温扩增方法或权利要求8所述试剂盒在检测桑尼短体线虫方面的应用。
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