[发明专利]一种从柑橘皮中同步分离和纯化β‑隐黄素及豆甾醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的技术工艺和参数。

背景技术

β-隐黄素是类胡萝卜素中叶黄素的一种，具有抗癌、抗氧化、抑制骨质疏松等多种生理功能，结构式如下：

其主要存在于高等植物、真菌、蓝藻等中；近期研究表明，β-隐黄素还是一种良好的维生素A前体物质。

植物甾醇是一种存在于植物中的天然活性物质，是植物体构成细胞膜的成分之一，也是多种激素、维生素D及甾体化合物合成的前体，具有抗癌、抗炎、抗氧化、降低血脂和胆固醇、减少冠心病发生等生理功能。豆甾醇是植物甾醇的典型代表之一，结构式如下：

其主要存在各类植物及油脂脱臭馏出物中。豆甾醇除具有植物甾醇的一般药理特性外，还主要用于合成各种激素及维生素D₃，被广泛应用于生物及医药行业。由于柑橘皮来源容易且成本较低，从橘皮中提取天然β-隐黄素成为获取β-隐黄素的主要途径；柑橘果皮中除含有果胶、纤维素、色素外，还含有黄酮、甾醇等生物活性物质，但目前关于从皮渣中提取豆甾醇的研究鲜见报道。

以下文献中所记载的内容，可以作为β-隐黄素和豆甾醇的评判依据：1、刘玉朋.红薯茎叶化学成分的提取分离与结构鉴定[D].吉林大学,2013；2、刘志华,杨志学.马蹄莲中植物甾醇成分的分离与结构鉴定[J].中国药师,2007,10期:978-979.DOI:doi:10.3969/j.issn.1008-049X.2007.10.015；3、井凤,王丽,徐双双,等.辣椒中β-隐黄质的分离制备[J].食品科学,2013,第6期:10-13；4、Khachik,F,Chang,ANGana,A,Mazzola,E.Partial synthesis of(3R,6'R)-alpha-cryptoxanthin and(3R)-beta-cryptoxanthin from(3R,3'R,6'R)-lutein[J].Journal of Natural Products,2007,70(2):220-226.

发明内容

本发明提供一种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法，可同时获得高纯度的β-隐黄素和豆甾醇。

技术方案如下：

一种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法，其关键在于包括以下步骤：

步骤一、将柑橘皮干燥并磨粉；

步骤二、用无水乙醇浸提预处理后的原料，减压浓缩得到总酯萃取物；

步骤三、首先将所述总酯萃取物溶于正己烷中得到萃取物溶液，再向萃取物溶液中加入KOH-乙醇溶液进行皂化反应，皂化反应完成后进行萃取，最后水洗并减压浓缩；

步骤四、采用色谱法分离纯化，以β-隐黄素标准品为对照，收集同时含有甾醇及β-隐黄素的洗脱液；

步骤五、将步骤四中得到的洗脱液进行浓缩，得到浓缩物；

步骤六、首先选用正己烷-丙酮对步骤四中得到的洗脱液的浓缩物进行双溶剂法结晶，结晶出豆甾醇晶体，再将上述去除豆甾醇晶体后的洗液进行再次浓缩，得到主要含β-隐黄素的浓缩物，最后选用乙醚-甲醇进行结晶，便可结晶出β-隐黄素晶体。

上述步骤二中，在38～45℃的条件下对柑橘皮粉进行浸提。

上述步骤三中，所述萃取物溶液的质量浓度为0.046～0.056％，所述KOH-乙醇溶液的质量浓度为8～12％，所述萃取物溶液与KOH-乙醇溶液的体积比为1:1，皂化时间为12h。

上述步骤三中，皂化反应完成后，加入等体积的正己烷进行萃取，分离得到正己烷相，再用等体积的质量浓度为0.5％的NaCl水溶液水洗正己烷相，最后减压浓缩。

上述步骤四中，采用硅胶柱层析分离纯化，采用正己烷湿法装柱，采用正己烷：丙酮：甲醇＝92.5:7:0.5的体积比等度洗脱，并用薄层色谱法检测。

上述步骤六中，结晶出豆甾醇晶体后，用正己烷清洗晶体，直至晶体无色；再将溶液进行浓缩干燥，最后选用乙醚-甲醇对干燥后的物质进行结晶，得到β-隐黄素晶体，并用甲醇清洗晶体，直至甲醇清洗液无色为止。

上述步骤四中薄层色谱的条件为：展开剂为石油醚:乙醚＝7:3，显色剂为10％硫酸-无水乙醇，95℃烘烤2min。

有益效果：采用本发明的一种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法，能同时从柑橘皮中提取出β-隐黄素和豆甾醇，方法简单实用，分离效果好，分离产物纯度高，适合工业化生产。

附图说明