[发明专利]一株高产葡萄糖氧化酶的解脂耶氏酵母

说明书

本发明公开了一株高产葡萄糖氧化酶的解脂耶氏酵母，属于微生物技术领域。本发明的所述解脂耶氏酵母于2015年12月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC M 2015736。本发明的菌株可利用蔗糖等廉价的作碳源，适合高密度发酵，而且解脂耶氏酵母被认为是安全的，可用于食品、SCP等的工业化生产。本发明的菌株在以甘油为唯一碳源，3L发酵罐发酵96h后，葡萄糖氧化酶酶活力达到134U/ml。

技术领域

本发明涉及一株高产葡萄糖氧化酶的解脂耶氏酵母，属于微生物技术领域。

背景技术

葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase，简称GOD，E.C.1.1.3.4)是一种黄素糖蛋白，在有氧条件下能专一性地催化β-D-葡糖生成葡萄糖酸和过氧化氢。GOD广泛分布于动植物和微生物体内。由于微生物生长繁殖快、来源广，是生产GOD的主要来源，主要生产菌株为黑曲霉和青霉。目前GOD的应用领域不断拓展，国内外市场需求量急剧增加。目前GOD的应用领域不断拓展，国内外市场需求量急剧增加。目前GOD基因已经在毕赤酵母GS115、大肠杆菌、瑞氏木霉等中得到表达，但还未见其在非常规酵母解脂耶氏酵母中进行表达研究，而解脂耶氏酵母被认为是安全的，因此，能用于食品和药物生产上。

解脂耶氏酵母Pold菌系中，编码能水解其它蛋白质的AEP基因被剔除，使得外源蛋白能更好地表达。人们将Pold系改造，生成一系列的派生菌系，如Polh、Polg、Polf。Polh、Polg在Pold系基础上进行改造，只有一个营养缺陷型基因。Polg被改造为适合以pBR322为基础的质粒整合的菌系，Polh将穿梭质粒的细菌部分在整合入酵母前剔除掉，形成酵母框。它们在Pold系的基础上均被剔除了酸性蛋白酶基因，消除了全部蛋白酶活性。

发明内容

本发明的目的是提供一株高产葡萄糖氧化酶的解脂耶氏酵母，所述解脂耶氏酵母于2015年12月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 2015736。

所述解脂耶氏酵母可利用蔗糖等廉价碳源，适合高密度发酵，而且解脂耶氏酵母被认为是安全的，可用于食品、SCP等的工业化生产。所述解脂耶氏酵母在以甘油为唯一碳源，3L发酵罐发酵96h后，葡萄糖氧化酶酶活力达到134U/ml。

所述解脂耶氏酵母是对申请号为2014106530764(一种重组表达葡萄糖氧化酶的解脂耶氏酵母及其应用)的专利申请中的重组酵母进行诱变得到的。

本发明还提供所述解脂耶氏酵母在生产葡萄糖氧化酶方面的应用。

所述应用是将解脂耶氏酵母种子液体以10％的接种量转接至发酵培养基中，于3L罐上进行发酵培养，甘油补料为30g/l，pH控制5.0，培养温度28℃。

所述发酵培养基按g/L计含有：甘油20，酵母提取物1.32，氯化铵1.32，磷酸二氢钾0.32，无水硫酸镁0.132，维生素B₁ 3.34×10^-4；溶于pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液中。

所述发酵培养具体是：Biotron 3L罐罐上培养，装液量1L，接种量为10％，于28℃培养，搅拌转速为600rpm，通气量2.0vvm，pH控制5.0，当溶氧第一次反弹且大于60％时，短时流加30g/L的甘油，甘油流速7.5g/h，培养至发酵结束。

本发明还要求保护所述解脂耶氏酵母在食品或制备药物方面的应用。

本发明的有益效果：

(1)本发明的解脂耶氏酵母，可利用蔗糖等廉价的作碳源，适合高密度发酵。解脂耶氏酵母被认为是安全的，可用于食品、SCP等的工业化生产；

(2)本发明的解脂耶氏酵母发酵生产葡萄糖氧化酶，培养96h的产量可达134U/ml，生产强度可达1.396U/(ml·h)。