[发明专利]一种海洋链霉菌及其次级代谢产物Streptochlorin的发酵制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及微生物发酵与天然产物提取分离技术领域，尤其是涉及一种海洋链霉 菌及其次级代谢产物Streptochlorin的发酵制备工艺。

背景技术

Streptochlorin是一种吲哚类抗生素，Jae等人于2007年从海洋来源的链霉菌 04DH110中分离得到，并发现该化合物对人体细胞具有抗增值的活性(Jae,SH.;Jeong, HS.;Lee,HS.;Park,SK.;Kim,HM.;Kwon,HJ.J.Microbiol.Biotechnol.2007, 17,1403)。在近几年的研究中，该化合物被证实具有很好的抗肿瘤抗过敏活性(Lee,SH.; Shin,HJ.;Kim,DY.;Shim,DW.;Kim,TJ.;Ye,SK.;Won,HS.;Koppula,S.; Kang,TB.;Lee,KH.PLoSOne.2013,8(9),e74194)，抗炎活性(Shim,DW.;Shin, HJ.;Han,JW.;Shin,WY.;Sun,X.;Shim,EJ.;Kim,TJ.;Kang,TB.;Lee,KH. Int.J.Mol.Sci.2015.16,6902)，抗菌活性(Zhang,MZ.;Chen,Q.;Xie,CH.; Mulholland,N.;Turner,S.;Irwin,D.;Gu,YC.;Yang,GF.;Clough,J. EuropeanJournalofMedicinalChemistry.2015,92,776)等。

国内外文献对Streptochlorin的发酵鲜有报道，实验中，我们利用一般的发酵条 件和制备条件，发现Streptochlorin的产量少，得率低，这成为该化合物进一步研究的限制 因素，不利于后期的工业开发。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种海洋链霉菌及其次级代谢产物 Streptochlorin的发酵制备工艺，该方法可大幅提高次级代谢产物Streptochlorin产量， 快速、高效制备高纯度的Streptochlorin。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种海洋链霉菌，该菌为 SYYLWHS-1-4菌株，分类命名为链霉菌（Streptomycessp.），于2015年9月30日保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.11468。

该菌株在平板培养初期呈现淡黄色半透明，菌落呈圆形，表面光滑湿润，随着培养 时间延长，气生菌丝发育，覆盖整个菌落表面，呈现白色。

一种海洋链霉菌次级代谢产物Streptochlorin的发酵制备工艺，包括以下步骤：

（1）固体培养

将保藏在-80℃冰箱中的保藏编号为CGMCCNo.11468的海洋链霉菌涂布于固体平板 培养基上，在27.5℃培养箱中培养48h得到平板菌种；

（2）种子培养

取生长良好的平板菌种，接种于装液量为50%的液体培养基中，在27.5℃，150r/min 的条件下培养48h得到种子液；

（3）发酵培养

取生长良好的种子液，按体积分数5%的接种量接种于装液量为50%的液体培养基中，于 27.5℃，150r/min的条件下培养11d得到发酵液；

（4）发酵液体处理

取发酵液加入等体积的乙酸乙酯充分萃取一次，收集萃取液，再取萃余液加入等体积 的乙酸乙酯重复萃取一次，再取萃余液加入等体积的乙酸乙酯萃取一次，合并三次萃取所 得萃取液，旋转蒸发至干，再次用甲醇复溶，得到进样液；

（5）Streptochlorin的制备

采用高速逆流色谱（HSCCC）法对进样液进行分离纯化，得到海洋链霉菌次级代谢产物 Streptochlorin单体。

步骤（1）所述的固体平板培养基的配方如下：纯水1L、酵母提取物1.889g、可溶 性淀粉8.636g、K₂HPO₄0.359g、MgSO₄0.625g、CaCl₂2.5g、海水晶25g、琼脂15g。