[发明专利]一种稳定、抗干扰能力强的血清5’-核糖核苷酸水解酶检测试剂及检测方法

说明书

本发明涉及血清5’‑核糖核苷酸水解酶检测技术领域，特别涉及一种血清5’‑核糖核苷酸水解酶检测试剂。采用PIPES缓冲液，添加多种稳定剂，显著改善了试剂的稳定性；通过添加β‑甘油磷酸钠、胆红素氧化酶和抗坏血酸氧化酶，可以有效避免碱性磷酸酶、胆红素和抗坏血酸的干扰，大大增强试剂的抗干扰能力。此外，优选的新型两性表面活性剂十二烷基二甲基甜菜碱（BS‑12）的加入可防止反应体系浑浊，增强底物的稳定性，提高试剂的抗干扰能力。

技术领域

本发明涉及血清5’-核糖核苷酸水解酶检测技术领域，特别涉及一种血清5’-核糖核苷酸水解酶检测试剂，还涉及使用此检测试剂的检测方法。

背景技术

5’-核糖核苷酸水解酶（5’-NT）是一种特殊的水解酶，能特异性地将次黄嘌呤核苷酸水解为次黄苷和磷酸。此酶广泛存在于人体组织，如肝、胆、肠、脑、心、胰等，5’-NT经肝细胞膜进入胆汁，随之进入血清中，是检测肝胆疾病的指标之一。肝内外胆管阻塞和伴随循环转移的乳房切除术后的病人此酶升高明显。诊断肝胆疾病5’-NT 较肝内其它酶类更敏感。

血清5'-NT 测定有化学比色法、速率法、酶比色法等，目前酶比色法较常用。 化学比色法虽然试剂易得，但操作麻烦，试剂种类多，不适宜自动分析难以自动化。酶比色法，采用多级偶联酶促反应，操作简单，适用自动化分析，但存在稳定性差，易受干扰等缺点。

鉴于此，本发明在酶比色法的基础上优化反应体系，添加稳定剂丙三醇、聚乙二醇6000、甘露醇、海藻糖、BSA、乙二醇等可有效提高试剂的稳定性；并且通过添加β-甘油磷酸钠、胆红素氧化酶和抗坏血酸氧化酶，可以有效避免碱性磷酸酶、胆红素和抗坏血酸的干扰，大大增强试剂的抗干扰能力。此外，优选的新型两性表面活性剂十二烷基二甲基甜菜碱（BS-12）的加入可防止反应体系浑浊，增强底物的稳定性，提高试剂的抗干扰能力。该试剂操作简便快速，适用于自动化分析，是一种更加稳定、抗干扰能力强的血清5’-核糖核苷酸水解酶（5’-NT）试剂。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测血清5’-核糖核苷酸水解酶（5’-NT）的试剂及使用该试剂检测血清5’-核糖核苷酸水解酶活性的方法。该试剂盒采用酶比色法，可以有效检测血清5’-核糖核苷酸水解酶的活性，抗干扰能力强，稳定性好等优点。

基本原理：

5’-NT催化底物中次黄嘌呤核苷酸反应产生次黄苷和磷酸，再经过一系列催化反应最终生成红色醌类。在波长550nm处检测其吸光度，其变化程度与样本中的5’-NT活性成正比。

5’-NT

次黄嘌呤核苷酸＋H₂O次黄苷＋磷酸

核苷酸磷酸化酶

次黄苷＋磷酸次黄嘌呤＋核酸-1-磷酸

黄嘌呤氧化酶

次黄嘌呤＋2H₂O＋2O₂尿酸＋2H₂O₂

POD

2H₂O₂＋EHSPT＋4-AA4H₂O＋红色醌类

注：EHSPT：N-乙基-N-(2-羟基-3硫代丙基)-3-甲基苯胺4-AA：4-氨基氨替吡啉POD：过氧化物酶

本发明是通过以下步骤得到的：

一种血清5’-核糖核苷酸水解酶检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：

试剂R1中含有