[发明专利]试卤灵为基础结构的新型荧光比率探针在检测H2S中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及含试卤灵的荧光比率探针的制备与检测H₂S应用。

背景技术

H₂S溶解性极好且有剧毒，即使稀的硫化氢也对呼吸道和眼睛有刺激作用，并引起头痛，浓度达1mg/L或更高时，对生命有危险。是强烈的神经毒素，对粘膜有强烈刺激作用。硫化氢主要经呼吸道吸收，人吸入(70～150mg/m³)/(1～2h)，出现呼吸道及眼刺激症状，硫化氢可以麻痹嗅觉神经。吸入(300mg/m³)/1h，6～8min出现眼急性刺激症状，稍长时间接触引起肺水肿。吸入硫化氢能引起中枢神经系统的抑制，有时由于刺激作用和呼吸的麻痹而导致最终死亡。在高浓度硫化氢中几秒内就会发生虚脱、休克，能导致呼吸道发炎、肺水肿，并伴有头痛、胸部痛及呼吸困难。

荧光探针因为具有简单操作性、高灵敏性以及高选择性而被应用于检测金属离子以及其他小分子。以试卤灵为基础结构的荧光化合物由于可以与HS：作用容易生成六元环离去而被应用检测H₂S，因此可将它开发成为H₂S的探针。

本发明基于试卤灵类荧光化合物的荧光性质，对其引入5-溴代戊酰氯进行修饰，合成出一个新型的荧光探针，并研究它对于H₂S活性评价。

发明内容

本发明涉及一种含试卤灵类衍生物及其制备与在检测H₂S中的应用。

本发明的技术方案如下：

一种含试卤灵类荧光衍生物，名称为名为3-oxo-3H-phenoxazin-7-yl5-iodopentanoate，其化学结构式如下：

新型荧光探针检测H₂S的原理：

新型荧光探针的合成：

步骤1在茄形瓶中依次加入试卤灵，用溶剂溶解，再加入5-溴代戊酰氯，在适当条件下搅拌，然后加入适量的催化剂。在一定的温度下反应一段时间(TLC监测反应)，在反应结束后，减压蒸去溶剂得到粗产品，粗产品再采用适当有机溶剂经过柱层析提纯获得中间体。

步骤2将中间体溶解到溶剂中，加入KI到茄形瓶中，在适当条件下搅拌。回流搅拌反应一段时间(TLC监测反应)，反应结束后，减压蒸去溶剂得到粗产品，将粗产品经柱层析提纯获得目标化合产物即新型荧光探针。

上述制法中所述层析，是采用200-300目柱层析硅胶柱，洗脱液为一定比例的无水乙酸乙酯和石油醚。

本发明的含试卤灵的荧光比率探针检测H₂S具有较好的效果。

具体实施方式

通过以下实施例进一步详细说明本发明，但本发明的范围并不受这些实施例的任何限制。

实施例一：新型荧光探针的制备

称取试卤灵0.5mmol，5-溴代戊酰氯0.5mmol溶解在100mL的无水二氯甲烷中，常温条件下搅拌12h。反应毕，减压蒸除溶剂得到粗产品，经柱层析(200-300目硅胶柱，洗脱剂为无水乙酸乙酯和石油醚1∶10到1∶4梯度洗脱，得到纯净的中间体。

称取中间体0.1mmol加入丙酮溶解，称取0.1mmolKI加入其中，50℃下搅拌回流2h。反应结束后，减压蒸除溶剂得到粗产品，经柱层析(200-300目硅胶柱，洗脱剂为无水乙酸乙酯和石油醚1∶10洗脱，得到纯净的目标产物即新型荧光探针。

实施例二：新型荧光探针的紫外吸收活性研究

1.实验材料和方法

1.1药品与试剂

利用紫外-可见光分光光度计来测定荧光探针的紫外吸收活性研究。

(1)PBS缓冲液的配制：135mMNaCl，4.7mMKCl，10mMNa₂HPO₄，2mMNaH₂PHO₄，pH7.4。

(2)实验药液的配制：将测试样品用少量的DMSO溶解配成储备液，一般按实验最高浓度的10倍配制储备液。

(3)Na₂S溶液的配制：将Na₂S用少量的去离子水溶解配制成储备液。

(4)加药：将2μL测试药液按照最终浓度分别加入到各个1.5ml离心管中。实验分为药物试验组(加入50μM的Na₂S)、对照组(只加测试药，不加Na₂S)。将加药后的离心管室温静置2min。