[发明专利]一种鉴定中国明对虾遗传性别的DNA序列标签及其应用

说明书

本发明涉及一种中国明对虾性别差异的DNA序列标签及其应用。通过高通量测序手段，分别对雌性个体和雄性个体DNA的混池进行高通量测序，测序结果经过生物信息学分析筛选出在雌雄混池中有显著差异的DNA序列片段，获得的差异片段在不同来源的雌雄个体中进行验证，最终获得一条可以用于鉴定中国明对虾雌雄性别的DNA序列标签，利用该DNA序列标签可以实现该种对虾遗传性别的准确鉴定。本发明方法具有高效、准确、可靠的特点，在对虾性别鉴定、性别决定和分化机制及性别控制研究中具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及水产生物技术中的对虾性别鉴定和性别控制技术，具体地说，一种鉴定中国明对虾遗传性别的DNA序列标签及其应用。

背景技术

中国明对虾是我国重要的养殖虾类，由于其个体较大，营养价值高，具有重要的经济价值。中国明对虾与其他对虾种类一样，雌雄个体的大小存在明显差异，雌性个体在生长的中后期生长速度远高于雄性个体，因此实现中国明对虾的单性控制，培育单性群体，对于提高对虾养殖产量、增加经济效益具有重要意义。

要培育中国明对虾的单性群体，首先需要实现对虾遗传性别的鉴定。虽然在对虾生长到一定阶段时可以通过表型的外部性征实现雌雄虾的性别鉴定，但是在科学研究和实际生产中，如果能够在发育早期实现性别的鉴定，可以有针对性地对某一性别的个体开展实验和养殖，加快科学研究和实际生产的效率。

在对虾性别标记的研究中，已经有较多进行性别标记筛选的报道，Staelens etal.(2008)构建了斑节对虾的高密度遗传连锁图谱，并从遗传图谱上发现了两个性别差异的标记，该标记在其他遗传来源的斑节对虾群体中也证实了其可以作为一种进行性别鉴定的标记，并且该团队也申请了相关专利一项(虾和对虾的性别特异性标记，中国发明专利，申请号：200780015173.9)；Zhang et al.(2006)通过QTL定位方法筛选到了一个凡纳滨对虾性别特异性的微卫星位点，后来证实该微卫星位点是家系特异性的，在其他来源的个体中并不适用；同样，Alcivar-Warren et al.(2007)的研究也发现了凡纳滨对虾性别特异性的微卫星标记，但是也是仅限于所研究的群体。然而，由于对虾不同物种的差异性，其它物种的分子标记并不能用于中国明对虾的性别鉴定。在中国明对虾的研究中，虽然构建了较多的连锁图谱，但是未筛选到相应的性别鉴定标记(Li et al.2006；Sun et al.2008；Liuet al.2010)。Li et al.(2013)通过基因差异表达分析的方法筛选到了一个中国明对虾雌雄差异表达的基因，并将该标记开发成了一种可以用作雌雄幼体性别鉴定的标记(中国发明专利，公开号：101709332A)，然而此标记是在转录组水平上发展的标记，受虾的生长发育时期的影响较大，不能用于对虾在幼虾阶段之前的性别区分。目前用于中国明对虾性别鉴定的DNA标记还没有报道。

参考文献

1.Alcivar-Warren,A.,D.Meehan-Meola,S.W.Park,Z.Xu,M.Delaney andG.Zuniga(2007).ShrimpMap:A low-density,microsatellite-based linkage map ofthe pacific whiteleg shrimp,Litopenaeus vannamei:Identification of sex-linkedmarkers in linkage group 4.Journal of Shellfish Research 26(4):1259-1277.

2.Li,S.,F.Li,Y.Xie,B.Wang,R.Wen,C.Zhang,K.Yu and J.Xiang(2013).Screening of Genes Specifically Expressed in Males of Fenneropenaeuschinensis and Their Potential as Sex Markers.Journal of Marine Biology:1-9.