[发明专利]玉米赤霉烯酮的检测方法及检测试剂盒在审
| 申请号： | 201510947194.0 | 申请日： | 2015-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN105543345A | 公开（公告）日： | 2016-05-04 |
| 发明（设计）人： | 易守军;邓克勤;林雨欢;任婕凤;唐春然;符方芬;黄盛茂;曾云龙 | 申请（专利权）人： | 湖南科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/115 |
| 代理公司： | 北京卓恒知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11394 | 代理人： | 徐楼 |
| 地址： | 411201 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 玉米 赤霉烯酮 检测 方法 试剂盒 | ||
1.一种玉米赤霉烯酮的检测方法，该方法包括如下步骤：
(A)使玉米赤霉烯酮核酸适体(Apt)和可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探 针DNA(Sp)杂交，形成杂交链；
(B)使该杂交链与待测样品作用，当待测样品中有玉米赤霉烯酮存在时，杂交链选择性 地与玉米赤霉烯酮反应释放出单链信号探针DNA；
(C)为了消除杂交链的干扰，利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用外切酶，将双链 DNA切成碎片，留下单链信号探针DNA；
(D)利用银离子不能在玉米赤霉烯酮核酸适体-玉米赤霉烯酮结合体中被还原生成荧 光发射峰在630nm左右的银纳米簇，银离子只在单链信号探针DNA(Sp)中还原并生成被Sp修 饰的在630nm左右有强的荧光发射的银纳米簇的原理，在银离子还原检测体系中检测体系 的荧光强度，从而测定待测样品中的真菌毒素玉米赤霉烯酮的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述玉米赤霉烯酮核酸适体为5’- GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单链 信号探针DNA为5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCGCACTTCACACGATT-3’。
4.一种检测玉米赤霉烯酮的试剂盒，其至少包括：使玉米赤霉烯酮核酸适体、可与玉米 赤霉烯酮核酸适体杂交的单链信号探针DNA、DNA扩增体系、外切酶、银离子还原检测体系。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中，所述玉米赤霉烯酮核酸适体为5’- GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。
6.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其中，所述可与玉米赤霉烯酮核酸适体杂交的单 链信号探针DNA为5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCGCACTTCACACGATT-3’。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的试剂盒，其中，所述DNA扩增体系包括缓冲溶液 (Tris-HCl、MgCl2、(NH4)2SO4)、dNTP和Phi29DNA聚合酶。
8.根据权利要求4-7中任一项所述的试剂盒，其中，所述外切酶为ExoIII核酸外切酶。
9.一种可用于检测玉米赤霉烯酮的玉米赤霉烯酮核酸适体，其碱基序列为5’- GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTGGGGATGGGAGGTTGTTTACGCAGGAGATGTTAATCGTGTGAAGTGC-3’。
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