[发明专利]一种草莓专用抗重茬生物有机肥的制备方法

权利要求书

1.一种草莓专用抗重茬生物有机肥的制备方法，其特征在于：将畜禽粪和食用菌栽培后的菌渣混合，用解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)JN2、沼泽红假单胞菌（Rhodop seudanonas palustris）和黑曲霉( Aspergillus nige )发酵食用菌栽培后的菌渣和畜禽粪的混合物，即为草莓专用抗重茬生物有机肥，具体制备方法如下：

（1）肥料混合：将食用菌栽培后的菌渣与牛粪按重量比1:1混合均匀，调整C/N比值为20~30，pH值调至中性，水分调节至55-65%；

（2）菌剂的制备：

A.解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)JN2菌液的制备：4℃保存的解淀粉芽孢杆菌JN2接种于羧甲基纤维素钠液体培养基上37℃，100~150rpm摇床培养过夜，制备成种子液；

将种子液按体积比1%~5%的接种量接种于发酵罐中灭菌的羧甲基纤维素钠液体培养基中，罐内压保持0.02-0.04MPa，温度37℃，溶解氧1.8±0.2mg/L，转速150r/min，发酵培养两天，得到JN2发酵液，检测发酵液中有效活菌数为4×10⁸cfu/mL；

B.沼泽红假单胞菌（Rhodop seudanonas palustris）菌液的制备：GH培养基装满整支试管，将沼泽红假单胞菌菌种无菌条件接种于GH培养基中，温度30℃，光照强度5000Lx静置厌氧培养，至菌液变为深红色即得种子液；

将沼泽红假单胞菌扩大培养，培养基和培养条件与制备种子液的方法相同；当菌液颜色变成深红色时，得到沼泽红假单胞菌发酵液，检测发酵液中有效活菌数为4×10⁸cfu/mL；

C.黑曲霉( Aspergillus nige )菌剂的制备：黑曲霉菌种接种于普通PDA固体培养基平板上，28℃温度倒置黑暗培养，待长出新鲜菌丝后，挑菌丝接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃，100~150rpm摇床培养，待培养基中长出大量菌丝团后，即获得黑曲霉种子液；

将小麦麸皮洒水拌匀，制成含水率55-65%的麸皮培养基，110-120℃高压灭菌后冷却，按每千克麸皮培养基接入150mL菌液的比例接入黑曲霉种子液，搅拌均匀，28℃静置培养至大量孢子产生时停止培养，将培养物置于30℃烘箱内烘干后即得黑曲霉菌粉；

（3）接种微生物发酵：按每平方米混合肥料中接入10kg的比例向混合肥料中加入黑曲霉菌粉，拌匀后堆置发酵，当温度低于50℃时翻堆后继续发酵，发酵时间为30~45天；发酵完成后，按每平方混合肥料中接入10L的比例分别加入解淀粉芽孢杆菌菌液和沼泽红假单胞菌菌液，调整pH值为6~7，水分含量为55-65%，搅拌均匀后，摊成15-25cm的薄层进行第二次发酵，控制温度为25~30℃，发酵7~10天后，将其搅拌均匀风干至含水率≤15%，即得到草莓专用抗重茬生物有机肥；

所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)JN2在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCC No:10677，保藏日期为：2015年4月1日，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码为100101。

2.根据权利要求1所述的一种草莓专用抗重茬生物有机肥的制备方法，其特征在于：所述羧甲基纤维素钠培养基配方为：羧甲基纤维素钠15g/L，酵母粉1g/L，磷酸二氢钾1g/L，硝酸铵1g/L，硫酸镁0.5g/L；所述GH培养基配方为：磷酸二氢钾1g/L，乙酸钠1g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸铵1g/L，氯化钠1g/L，氯化钙0.1g/L，琥珀酸钠1g/L，酵母粉0.5g/L，蛋白胨0.5g/L，pH值6.2。

3.根据权利要求1所述的一种草莓专用抗重茬生物有机肥的制备方法，其特征在于：所制备的草莓专用抗重茬生物有机肥总有效活菌数含量≥4×10⁸CFU/mL。