[发明专利]转基因马铃薯AV43-6-G7品系鉴定的引物、探针和方法有效
| 申请号： | 201510948964.3 | 申请日： | 2015-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN105349693B | 公开（公告）日： | 2018-08-14 |
| 发明（设计）人： | 高宏伟;孙敏;肖西志;孙雯娴;徐洋 | 申请（专利权）人： | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266002 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转基因 马铃薯 av43 g7 品系 鉴定 引物 探针 方法 | ||
1.转基因马铃薯AV43-6-G7品系鉴定的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针的序列是：
上游引物Potato AV43-6-G7 primerF：5’-ggtatcaggttctggaataagaccaa-3’；
下游引物Potato AV43-6-G7 primerR：5’-tgtcgtgccagctgcatta-3’；
探针Potato AV43-6-G7 Probe ：5’-FAM- cccgcgcgttggccgat- BHQ-3’。
2.一种使用权利要求1所述的引物和探针进行转基因马铃薯AV43-6-G7品系鉴定的方法，其特征在于，依次包括下列步骤：
（1）在PCR反应管中加入24µL PCR扩增反应液A和1µL 样品DNA，混匀；
（2） 将PCR反应管放入荧光定量PCR仪，按下述反应条件完成PCR扩增：
95℃ 15min，1个循环预变性；
95℃ 15sec，59℃ 1min，40个循环；
（3）应用荧光定量PCR仪随机软件，测定扩增曲线的Ct值；
有PCR扩增曲线且Ct值≤38判定为检出，无PCR扩增曲线或者PCR扩增曲线但有Ct值>38判定为未检出；
其中， PCR 扩增反应液A：
包括1×PCR Master Mix，所述1×PCR Master Mix内含热启动的Taq DNA 聚合酶、氯化镁、dNTP，400 nmol/L上下游引物；
上游引物Potato AV43-6-G7 primerF：5’-ggtatcaggttctggaataagaccaa-3’，下游引物Potato AV43-6-G7 primerR：5’-tgtcgtgccagctgcatta-3’，探针Potato AV43-6-G7Probe：5’-FAM- cccgcgcgttggccgat- BHQ-3’；
其中上游引物、下游引物和探针比例为2 ：2 ：1；
其中dNTP 内的四种脱氧核糖核酸的混合物的质量比为dTTP: dATP: dGTP: dCTP =1:1:1:1。
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