[发明专利]悬浮细胞球免疫荧光染色方法及染色装置

权利要求书

1.一种悬浮细胞球免疫荧光染色方法，其特征在于：所述染色方法包括以下步骤：

（i）组合细胞小室（1）和染色套件（2），取细胞球悬液加入细胞小室（1），弃染色套件（2）内培养基，清洗细胞球；

（ii）向细胞小室（1）中加入组织细胞固定液固定，弃染色套件（2）内液体，清洗细胞球；

（iii）向细胞小室（1）中加入Triton X-100通透细胞，弃染色套件（2）内液体，清洗细胞球；

（iv）向细胞小室（1）中加入封闭液封闭，孵育，弃染色套件（2）内液体；

（v）向细胞小室（1）中加入抗目的蛋白的一抗工作液，孵育，恢复至室温，回收染色套件（2）内一抗工作液，清洗细胞球；

（vi）向细胞小室（1）中加入抗一抗的荧光二抗工作液，孵育，弃染色套件（2）内液体，清洗细胞球；

（vii）向细胞小室（1）中加入DAPI染液染色细胞核，弃染色套件（2）内液体，清洗细胞球；

应用于一种悬浮细胞球免疫荧光染色方法的染色装置，包括细胞小室（1），所述细胞小室（1）为上端敞口的圆台型结构，细胞小室（1）的底面为有机材料膜，还包括套装于细胞小室（1）下端外部的染色套件（2），染色套件（2）是中空且上端敞口的圆台型结构，中部形成内底（3），内底（3）为下陷的圆锥面；染色套件（2）的上端内径与细胞小室（1）下端外径紧配合；染色套件（2）采用具有韧性的材料制成。

2.根据权利要求1所述的一种悬浮细胞球免疫荧光染色方法，其特征在于：所述清洗细胞球的方法为重组细胞小室（1）和染色套件（2），向细胞小室（1）中加入200ul PBS清洗细胞球，静置5min，拔下染色套件（2），弃染色套件（2）内PBS，重复操作三次。

3.根据权利要求1所述的一种悬浮细胞球免疫荧光染色方法，其特征在于：所述步骤（vii）完成染色后，重组细胞小室（1）和染色套件（2），向细胞小室（1）中加入150ul PBS，置于湿盒中4℃避光保存。

4.根据权利要求1所述的一种悬浮细胞球免疫荧光染色方法，其特征在于：所述步骤（ii）中组织细胞固定液为多聚甲醛，多聚甲醛的加入量为100ul，其质量浓度为4%，多聚甲醛固定时间为10min。

5.根据权利要求1所述的一种悬浮细胞球免疫荧光染色方法，其特征在于：所述步骤（iii）中Triton X-100的加入量为100ul ，其质量浓度为0.2%，Triton X-100通透细胞的时间为10min。

6.根据权利要求1所述的一种悬浮细胞球免疫荧光染色方法，其特征在于：所述步骤（iv）中封闭液为山羊血清，山羊血清的加入量为100ul ，其质量浓度为2%。

7.根据权利要求1所述的一种悬浮细胞球免疫荧光染色方法，其特征在于：所述步骤（vi）中抗一抗的荧光二抗工作液的加入量为100ul。

8.根据权利要求1所述的一种悬浮细胞球免疫荧光染色方法，其特征在于：所述步骤（vii）DAPI染液的加入量为100ul，DAPI染液染色细胞核的时间为5min。

9.根据权利要求1所述的一种悬浮细胞球免疫荧光染色方法，其特征在于：所述步骤（iv）中孵育的方法为置于湿盒中于37℃下孵育1h；所述步骤（v）中孵育的方法为置于湿盒中4℃孵育过夜；所述步骤（vi）中孵育的方法为于湿盒中37℃避光孵育2h。