[发明专利]一种鸡胚前脑神经元的培养方法

权利要求书

1.一种鸡胚前脑神经元的培养方法，其特征在于，所述培养方法包括：用含小牛血清的Neurobasal培养基培养鸡胚前脑神经元。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述培养方法还包括：用聚乙烯亚胺包被培养装置。

3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述聚乙烯亚胺包被培养装置具体为：在细胞培养皿、24孔板或者微电极阵列中加入0.05wt%聚乙烯亚胺溶液，放入培养箱过夜，第二天用去离子水洗涤，干燥后待用。

4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述小牛血清的添加量占培养基2wt%。

5.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述鸡胚前脑神经元按照以下步骤获得：

S11、取第7~9天的受精鸡蛋，消毒，用镊子将鸡蛋头部敲碎，去壳，拨开壳膜，取出鸡胚放到装有HBSS的培养皿；

S12、用镊子将鸡胚的头截断，放入另一个有HBSS的培养皿；

S13、加鸡胚的头部背面朝上置，压住中脑部位，并把前脑的脑膜揭开，取出两团白色的组织，放于有HBSS的培养皿，将贴附在白色组织外面残余的脑膜去掉，得到前脑组织；

S14、将前脑组织放入离心管，加入冰疗的HBSS溶液；

S15、吸出HBSS溶液，加入温热的胰酶EDTA溶液消化；

S16、加入M199培养基终止消化，反复吹打，形成均匀的细胞悬液；

S17、离心取上清，加入M199培养基，吹打均匀。

6.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述培养方法具体为：将鸡胚前脑神经元的细胞悬浮液加入培养装置，均匀分散，然后放入培养箱培养，之后将细胞液全部换成含小牛血清的Neurobasal培养基，以后每1~3天换一半的培养基。

7.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，所述培养方法具体为：

S21、将鸡胚前脑神经元悬浮液的细胞密度调节为3*10⁶/mL，滴20μL悬浮液于微电极阵列中央电极处，最终密度为1500~2000个/mm²；

S22、将微电极阵列放入100mm的培养皿，然后放入37℃、5%CO₂、95%湿度的培养箱培养；

S23、待细胞完全贴壁后加入1mLM199培养基，放入培养箱继续培养；

S24、24h后将细胞液全部换成含小牛血清的Neurobasal培养基，之后每3天换一半的培养基。

8.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，步骤S21后在微电极阵列套上带有聚全氟乙丙烯膜的密封环。