[发明专利]一种从甘蔗叶片上分离赤腐病菌的简易方法

说明书

本发明公开了一种从甘蔗叶片上分离赤腐病菌的简易方法，操作步骤：(1)取有甘蔗赤腐病症状的甘蔗叶片，用自来水将甘蔗叶片表面的尘土清洗干净，晾干；(2)将晾干后的甘蔗叶片放入密封容器中再置于温度为25～30℃环境中放置5～7天；(3)挑取放置5～7天后甘蔗叶片赤腐病发病部位长出的白色菌丝，接入培养基中培养；(4)将培养所得菌落边缘菌丝转入新的培养基中25～28℃培养，重复操作1～2次，即得纯化的赤腐病病原菌。本发明方法降低了赤腐病病原真菌分离过程中的能耗和劳动强度，简易、高效地获得目标病原真菌；尤其对于分离大量样本病原真菌，更有效、及时的实现了分离赤腐病病原真菌，大大缩短工作时间，提高了工作效率。

技术领域

本发明涉及一种病菌的分离方法，特别涉及一种从甘蔗叶片上分离赤腐病菌的简易方法。

背景技术

赤腐病是甘蔗生产上的一种重要真菌性病害。病原菌主要通过孢子借风雨、雾、露、昆虫及流水传播，病菌主要由伤口侵入。甘蔗赤腐病可常年发病，螟虫及飞虱为害重的易发病，冬春甘蔗栽培季节土壤过湿或偏酸，甘蔗萌芽生长受抑时发病重。甘蔗赤腐病菌常产生变种，形成很多形态小种和生理小种。因此，明确不同蔗区的生理小种以及优势种，对选育赤腐病抗病甘蔗品种以及科学防控该病害具有重要的意义。而病原的大量收集是研究该病害最重要的基础之一。

在我国，甘蔗赤腐病主要发生在叶片中脉上，其病原菌是半知菌亚门镰孢炭疽菌(Colletotrichum falcatum Went)。目前关于甘蔗赤腐病菌的分离多采用传统组织分离方法。常规分离方法对病害组织表面消毒要求严格，分离过程需全程在无菌条件下进行。常规分离方法的缺陷在于：1)操作过程严格要求无菌条件，需要准备消毒酒精、无菌水、剪刀、镊子等相关器材；2)较为耗时，正常情况下，分离一个样本至少需要10～20分钟，对于田间大量采集样本分离病原十分困难；3)甘蔗叶脉部分高度木质化，无菌条件下对样本组织的分离切割较为困难；4)植物组织放置在培养基中培养病原菌的过程中容易受到植物组织中内生细菌的污染而致使病原菌分离失败或降低病原菌分离的效率。《一种小麦纹枯病菌的分离方法》专利申请公开了对小麦纹枯病菌的分离方法，该方法需要用到75％酒精对植物组织进行消毒，然后用无菌水洗涤植物组织表面的酒精；处理3～4个植物组织样本后需更新酒精、无菌水、装酒精和无菌水的器皿、无菌的镊子、解剖刀以及剪刀等。对于大量分离样本的病原真菌，需要消耗大量的酒精，同时还需提前准备无菌水和大量无菌的器皿。无菌水的准备从高温(121℃)灭菌到冷却到可使用的室温至少需要4个小时。耗时较长，且成本相对较高。《一种分离植物病原真菌的方法》专利申请，公开了一种对植物病原真菌的分离方法，但是该方法是直接将植物组织放置在培养基中培养，植物组织中的内生细菌同时也可以在培养基中生长，且细菌的生长速度通常较真菌的生长速度快，可造成目标病原菌的分离失败，或分离出来的目标病原真菌容易与细菌混合生长，增加后面的纯化目标病原真菌的次数，降低分离效率。因此，开发一种分离甘蔗赤腐病菌的简易方法成为提高病原收集效率的迫切需要。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从甘蔗叶片上分离赤腐病菌的简易方法，从而克服现有技术中对操作环境严格、对病菌分离耗时长、且成本较高的缺点。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：

一种从甘蔗叶片上分离赤腐病菌的简易方法，包含以下操作步骤：

(1)取有甘蔗赤腐病症状的甘蔗叶片，用自来水将甘蔗叶片表面的尘土清洗干净，晾干；

(2)将步骤(1)中晾干后的甘蔗叶片放入密封容器中再置于温度为25～30℃环境中放置5～7天；

(3)挑取步骤(2)中放置5～7天后甘蔗叶片赤腐病发病部位长出的白色菌丝，接入培养基中25～28℃培养2～3天；