[发明专利]一种颅内动脉瘤诊治靶点及其应用

说明书

本发明涉及一种颅内动脉瘤诊治靶点及其应用。发明人基于高通量测序结果，挑选出候选基因HAPLN1，RT‑PCR验证结果证实了HAPLN1 mRNA在颅内动脉瘤组中高表达，干扰实验显示抑制HAPLN1的表达能够大大提高EPCs的迁移能力。本发明提供了颅内动脉瘤的潜在的治疗新靶点，具有重要的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及肿瘤标志物，具体涉及一种颅内动脉瘤诊治靶点及其应用，更具体的涉及HAPLN1基因及其表达产物在诊治颅内动脉瘤中的应用。

背景技术

颅内动脉瘤(intracranial aneurysm，IA)的形成病因和发病机制比较复杂，对IA的病因和形成机制的研究一直是国内外脑血管疾病研究的重点和热点领域。通常认为IA的形成、发展和破裂是由遗传、吸烟、年龄、环境、动脉粥样硬化、高血压和高血脂以及血流动力学改变等多重因素造成的。随着对其研究的不断深入，人们己经逐渐认识到血流动力学因素在IA的发生、发展和破裂过程中起着非常重要的作用。IA通常多发生在willis动脉环以及颅内动脉血管分叉处或血管弯曲部位，血液流经此处时形成冲击流等复杂流型使血管内皮细胞及其连接受损，炎症细胞和炎性物质等更易进入内皮下，引起的血管壁炎症和血管壁重构失调，研究显示持续的血流动力学变化会导致血管的病理重构，包括内弹力层的降解、平滑肌细胞和内皮细胞的缺失、细胞增殖减少等。血流动力学因素改变所导致的血管内皮损伤以及接下来出现的血管壁炎性细胞浸润、蛋白酶降解所致的血管壁病理性重构被认为是IA形成过程中的主要病理生理环节。无论是通过观察人的颅内动脉瘤壁分子病理学的研究还是从对IA形成过程中的实验研究均证明了血管内皮损伤是IA形成过程中的基本环节。但具体哪些基因参与其中仍有待研究。

发明人对5例颅内动脉瘤病例组和3例对照组组织样本进行高通量测序，结合生物信息学方法进行基因筛选，在差异表达明显的基因中挑选出高表达的候选基因HAPLN1，已有研究表明HAPLN1和假性软骨发育不全有关，但并没有研究揭示其与颅内动脉瘤的关系，发明人进行了分子验证，证实了HAPLN1在颅内动脉瘤组中高表达。本发明提供了新的颅内动脉瘤的监测治疗靶点，具有重要的临床应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种颅内动脉瘤诊断制剂，所述颅内动脉瘤诊断制剂检测HAPLN1基因和/或HAPLN1基因的表达产物。

进一步，所述颅内动脉瘤诊断制剂采用荧光定量PCR试剂盒、基因芯片、免疫方法检测颅内动脉瘤组织中HAPLN1基因的表达，优选的，所述的荧光定量PCR试剂盒中含有一对特异性扩增HAPLN1基因的引物；所述的基因芯片中包括与HAPLN1基因的核酸序列杂交的探针，更优选的，荧光定量PCR试剂盒内含有特异性检测HAPLN1基因的上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQ ID NO.9，下游引物序列为SEQ ID NO.10。

进一步，直接检测外周血和/或组织中HAPLN1基因和/或基因的表达产物。

进一步，所述的颅内动脉瘤的诊断制剂采用免疫方法检测颅内动脉瘤外周血和/或组织中HAPLN1基因的表达产物，优选的，所述免疫方法为ELISA检测和/或胶体金检测。

进一步，所述检测HAPLN1表达产物的ELISA法为使用ELISA检测试剂盒。所述试剂盒中的抗体可采用市售的HAPLN1单克隆抗体。进一步，所述的试剂盒包括：包被HAPLN1单克隆抗体的固相载体，酶标抗体，酶的底物，蛋白标准品，阴性对照品，稀释液，洗涤液，酶反应终止液等。

进一步，所述检测HAPLN1蛋白的胶体金法为使用检测试剂盒，所述的抗体可采用市售的HAPLN1单克隆抗体。进一步，所述的胶体金检测试剂盒采用胶体金免疫层析技术或胶体金渗滤法。进一步，所述的胶体金检测试剂盒硝酸纤维素膜上的检测区(T)喷点有抗HAPLN1单克隆抗体、质控区(C)喷点有免疫球蛋白IgG。

本发明的目的在于提供上述颅内动脉瘤诊断制剂在制备颅内动脉瘤诊断工具中的应用。