[发明专利]重组人乳头瘤蛋白表达

说明书

本发明公开了一种密码子优化的人乳头状瘤病毒主要衣壳蛋白L1编码基因，所述基因在被转入酵母细胞后可高效地表达重组人乳头状瘤病毒主要衣壳蛋白L1。本发明还公开了一种具有免疫原性的大分子，其主要由所述经密码子优化的人乳头状瘤病毒主要衣壳蛋白L1编码基因在酵母细胞中表达产生。本发明还公开了所述具有免疫原性的大分子的应用和组合物。

技术领域

本领域涉及分子生物学领域，具体而言，本发明涉及经密码子优化而适于在毕赤酵母中表达的HPV31人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1的基因，以及含有该人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1基因的载体，菌株，表达该基因的方法，及其用途。

背景技术

人乳头状瘤病毒(human papilloma virus，HPV)是乳多空病毒科多瘤病毒亚科的一个无包膜的小型双链环状DNA病毒。HPV可通过人体间的密切接触传播，引起被感染者的皮肤出现寻常疣和肛门生殖器尖锐湿疣等病变，被列为性传播疾病。1995年，国际癌症研究中心公布的研究结果证实，HPV与宫颈癌有密切的因果关系。由此可见，HPV感染已成为严重危害人类健康的病原体。因此，研制高效、廉价的HPV疫苗，对于预防女性宫颈癌和HPV感染所引起的性传播疾病具有十分重要的意义。

目前已经确定的HPV型超过100种。采用灵敏的检测方法，可以从几乎100％的宫颈癌患者病变组织中检测到高危HPV‐DNA。根据HPV亚型与女性生殖道恶性肿瘤的关系，将HPV分为低危型和高危型。HPV6、11、34、40、42等型多见于良性宫颈病变如宫颈湿疣及宫颈上皮轻度不典型性增生病变中，属HPV低危型；而宫颈上皮重度不典型增生及宫颈癌中以HPV16、18、31、33、35、39、45，52，58型感染更为多见，这些亚型为高危型。不同人群中一系列的研究已证实生殖道的HPV 16、18型感染与宫颈癌的发生高度相关，较其他危险因素更密切。宫颈癌患者中，约50‐60％是由HPV16感染引起，HPV18约占14％，HPV45占约8％，HPV31占约5％，其余型占23％(Walboomers JM.et al.J Pathol 1999；189:12‐19)。

宫颈癌是仅次于乳腺癌的第二大妇科恶性肿瘤，全球每年有超过50万的妇女被诊断出患有宫颈癌，27万妇女死于此病，年龄标准化感染率达10.5％。早在80年代初，Haraldzur Hausen就发现人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)的感染与宫颈癌发病有关，后续的大量研究也已证明HPV与宫颈癌及其癌前病变有密切联系。到目前为止，已发现了百余种HPV基因型，其中约40种可以感染生殖道粘膜。一个正常妇女一生中宫颈至少感染一种HPV的终生累计概率约为40％。

HPV是无包膜二十面体对称病毒，其病毒基因组DNA为闭合环状，长度约7200‐8000bp，由早期编码区(early region)、晚期编码区(late region)和位于两者之间的长调控区(long control region)组成。其中晚期编码区含两个开放阅读框(ORF)，编码病毒衣壳蛋白L1和L2。L1蛋白分子量约55kDa，为主要衣壳蛋白，以72个五聚体的形式支撑整个病毒衣壳结构，在不同型别中氨基酸序列高度保守，能够刺激机体产生保护性抗体。L2蛋白分子量较小，多位于L1蛋白内部。

昆虫表达系统、酵母表达系统、原核表达系统和哺乳动物细胞等多种表达系统都可以通过单独表达主要衣壳蛋白L1或联合表达L1+L2的方式获得病毒样颗粒(VLP)。L1单独表达得到的VLP与天然病毒衣壳结构类似，可用于诱导与保护免受病毒侵袭有关的高效价病毒中和抗体应答。