[发明专利]同时增强浒苔多糖抗氧化和抗菌活性的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学化工技术领域，涉及一种通过对降解浒苔多糖进行化学修饰从而增强其生物活性的方法。

背景技术

浒苔是我国东南沿海的一种大型经济性绿藻，资源丰富，本身可以食用，并含有多种活性物质，如浒苔多糖，脂类色素，酚类等。据文献报道，浒苔多糖具有提高哺乳动物免疫力、降血脂、消炎抗菌以及抗氧化等生理功能。因此将浒苔开发成功能食品有很好的前景。浒苔水提多糖主要为水溶性的硫酸多糖，分子量大，生物活性相对较低。如果将其降解成分子量相对较小的产物，则由于游离出更多的活性基团，则可能会使其生物活性得到提高。另外，通过化学修饰在多糖分子中引入一些功能基也能使多糖的生物活性得到提高。已有文献报道了浒苔多糖的硫酸化、磷酸化和乙酰化修饰，经修饰之后的浒苔多糖的抗氧化活性显著提高；也有报道浒苔多糖经硒化后提高抗菌活性，但尚未有同时提高浒苔多糖抗菌和抗氧化活性的方法报道。

目前现有的浒苔粗多糖的降解法包括：氧化降解法，酸降解以及酶解法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种能同时提高浒苔多糖的抗氧化、抗菌活性的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种同时增强浒苔多糖抗氧化和抗菌活性的方法，包括以下步骤：

1)、降解：

将浒苔粗多糖(EP)溶于蒸馏水配成浓度为2～20mg/mL(较佳为10mg/mL)的浒苔粗多糖溶液，升温至30～50℃后分别加入过氧化氢和维生素C，直至过氧化氢和维生素C的终浓度均为6～12mmol/L(较佳为9mmol/L)；然后保温搅拌反应2～4h，从而实现对浒苔粗多糖进行降解；

2)、将步骤1)所得的反应液浓缩至为原体积的1/2～1/4(约1/3)，得浓缩液；用4倍浓缩液体积的体积浓度为95％乙醇沉淀，于3～5℃静置10～12h(例如4℃过夜)，离心(8000rpm,20min)，取沉淀用水进行复溶，所述沉淀与水的用量比为18～22mg/ml(例如为20mg/ml)，然后用截留分子量为3500Da的透析袋透析46～50h(例如48h)，将所得的透析液冷冻干燥，得到降解浒苔多糖(DEP，为粉末状)；

备注说明：DEP不具备抗菌活性；

3)、羧甲基化：

将0.3g降解浒苔多糖(DEP，为粉末状)溶于12.5ml的二甲基亚砜(DMSO)中，室温下搅拌1.5～2.5h；然后加入质量浓度20％氢氧化钠溶液5ml，于35～45℃搅拌2.5～3.5h，得反应液Ⅰ；

将氯乙酸溶于12.5ml的二甲基亚砜(DMSO)和质量浓度20％氢氧化钠溶液5ml中，配制得浓度为2～6mol/L(较佳为3～4mol/L)的氯乙酸溶液，作为反应液Ⅱ；将反应液Ⅱ与上述反应液Ⅰ等体积混合(注：从而使混合得到的反应液中氯乙酸终浓度为1～3mol/L，较佳为1.5～2mol/L)，然后于45～65℃反应2～6小时(较佳为50～55℃反应3～4小时)；

4)、将步骤3)得到的反应液冷却至室温，调节pH至中性(可用0.5mol/L的HCl进行调节，中性，即，pH＝7.0)，然后加水稀释(水与步骤3所得反应液的体积比约为1：1)，再用3500Da的透析袋透析48h，将透析液浓缩至原体积的1/2～1/4(例如为1/3)、冷冻干燥，得到羧甲基化降解浒苔多糖(CDEP，为白色粉末状)。

所述羧甲基化降解浒苔多糖(CDEP)为降解浒苔多糖的羧甲基化衍生物(CDEP)。

作为本发明的同时增强浒苔多糖抗氧化和抗菌活性的方法的改进：羧甲基化降解浒苔多糖(降解浒苔多糖的羧甲基化衍生物)，具有较低的分子量(20-120kDa)，其羧甲基取代度(DS)为0.3～1.0。

作为本发明的同时增强浒苔多糖抗氧化和抗菌活性的方法的进一步改进：

所述步骤2)、4)中的冷冻干燥是：于-45～-55℃冷冻干燥22～26小时(例如为于-50℃冷冻干燥24小时)。

在本发明中，室温一般是指10～30℃。