[发明专利]一种从鳗鱼骨中提取的鳗鱼小分子肽及其提取方法

权利要求书

1.一种从鳗鱼骨中提取鳗鱼小分子活性肽的方法，其特征在于，包括 如下步骤：(1)鳗鱼骨处理；(2)低温粉碎处理；(3)细胞溶 出处理；(4)生物酶解处理；(5)后处理。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1) 鳗鱼骨处理：将新鲜的鳗鱼骨清洗干净，破碎，在蒸煮罐中，采用 温度为120-150℃的温度，0.13-0.15Mpa的压力蒸煮6-10h，骨渣 排出，得到骨汤，速冻后，形成冷冻骨汤油冻块，贮存于-18℃的 冷冻库内备用；(2)低温粉碎处理：采用粉碎机在低温对所述的 冷冻骨汤油冻块进行低温粉碎，粉碎温度控制在0-4℃之间，将所 述的冷冻骨汤油冻块粉碎为颗粒直径在0.02-0.1毫米的冷冻骨汤 油冻块颗粒；(3)细胞溶出处理：采用常压下4℃无氧水对粉碎 的冷冻骨汤油冻块颗粒进行浸渗水处理，水饱和时间为6-8小时， 所述无氧水以完全淹没原料为准；然后快速深度冷冻与融冻处理， 其中深冷冻处理时间为1-2h，冷冻温度为零下22-25℃，紧接着融 冻，即以常压下4℃水浴对处于深冷冻的冷冻骨汤油冻块颗粒进行 快速融冰，融冰处理时间为3-5h；重复所述的快速深度冷冻与融 冻处理过程2-3次，细胞壁结构被破坏，有效物质溶出，形成鳗鱼 寡肽骨汤；(4)生物酶解处理：将所述鳗鱼寡肽骨汤导入水解罐 中，加入复合酶，所述的复合酶制备方法如下，先将草芽孢杆菌、 双歧螺杆菌、鼠李糖乳杆菌、光合菌、地衣芽孢杆菌置于三角瓶中 进行培养，培养的温度为28-33℃，在200-250rpm/min下培养 25-35h，使菌体或者孢子浓度达到1×10¹⁴个/升(CFU/L)，制得 发酵剂，然后向发酵剂中加入营养素，控制营养素的重量是所述发 酵剂重量的1/5-1/8，所述的营养素为麦芽汁，即得到所述的复合 酶，按照鳗鱼寡肽骨汤与复合酶1000-1200∶1的重量比加入所述的 复合酶进行生物酶解处理，在所述生物酶解过程中保持水解罐中 pH为6.8-7.0，所述酶解温度为60℃，所述酶解时间为13-21℃， 得到初级鳗鱼小分子活性肽；(5)后处理：将所述的初级鳗鱼小 分子活性肽灭酶，快速升温至180-185℃并保持20-25s，然后 50-60℃/s降温至60℃使酶失活；然后采用高速离心机将酶解液以 60000-80000r/min的速度离心3-5min，将上层液和中层液合并输入 稀释罐体内，即酶解分离液，下层液被分离出去，然后采用热隔膜 低温浓缩技术进行浓缩，浓缩温度为45-50℃，真空度为 0.4-2.0MPa，将浓缩液输送到200-220℃的离心喷雾干燥塔内干燥 成粉沫，即得到所述的鳗鱼小分子活性肽。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(1)中采用温度为 130℃的温度，0.14Mpa的压力蒸煮7h，骨渣排出，得到骨汤，速 冻后，形成冷冻骨汤油冻块，贮存于-18℃的冷冻库内备用；步骤 2)中，粉碎温度控制在2℃，将所述的冷冻骨汤油冻块粉碎为颗 粒直径在0.05毫米的冷冻骨汤油冻块颗粒。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(3)中细胞溶出处 理：采用常压下4℃无氧水对粉碎的冷冻骨汤油冻块颗粒进行浸渗 水处理，水饱和时间为7小时，所述无氧水以完全淹没原料为准； 然后快速深度冷冻与融冻处理，其中深冷冻处理时间为2h，冷冻 温度为零下25℃，紧接着融冻，即以常压下4℃水浴对处于深冷冻 的冷冻骨汤油冻块颗粒进行快速融冰，融冰处理时间为3h；重复 所述的快速深度冷冻与融冻处理过程3次，细胞壁结构被破坏，有 效物质溶出，形成鳗鱼寡肽骨汤。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(4)中在三角瓶中 进行培养，培养的温度为30℃，在200rpm/min下培养28h，使菌 体或者孢子浓度达到1×10¹⁴个/升(CFU/L)，按照鳗鱼寡肽骨汤 与复合酶1000∶1的重量比加入所述的复合酶进行生物酶解处理， 在所述生物酶解过程中保持水解罐中pH为7.0，所述酶解温度为 60℃，所述酶解时间为21℃，得到初级鳗鱼小分子活性肽。