[发明专利]一种亚洲I型口蹄疫病毒多肽与SLA-2重链、轻链β2m复性、结晶的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种亚洲I型口蹄疫病毒多肽与荷包猪SLA‑2重链、轻链β2m复性、结晶的方法。本发明以荷包猪为例，构建SLA‑2胞外部区原核表达载体，转入宿主菌获得SLA‑2‑HB，设计与其匹配的口蹄疫病毒流行毒株多肽As63，与重链SLA‑2‑HB、轻链sβ2m通过稀释复性法进行共结合，分离复性蛋白质复合物并浓缩。本发明的结果显示，SLA‑2‑HB能够与亚洲I型口蹄疫多肽As63成功复性，晶体分辨率为，晶体SLA‑2‑HB‑As63‑sβ2m呈现非对称双分子的构型，两个分子中多肽的折叠方式相同，其中除了第二位和第九位为锚定残基外，第五位氨基酸也充当锚定残基的作用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种亚洲I型口蹄疫病毒多肽与荷包猪SLA-2重链、轻链β2m复性、结晶的方法。

背景技术

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)，简称MHC，是脊椎动物所具有的与免疫应答相关的一类基因群。MHC分为I，II和III类。其中，MHC I类分子与细胞免疫应答有关，这是由MHC I类分子特殊的空间结构决定的。从上世纪八十年代开始，人们逐渐开始了对MHC I类分子晶体结构的研究。

人的MHC，亦称为人的白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)。1987年，Bjorkman等(Nature,1987,6139:506-512)首次解析了人的HLA-A2的三维晶体结构，MHC I由重链α和轻链β2微球蛋白组成。重链α包括胞外区、跨膜区和胞内区，其中胞外区部分由3个结构域组成：α1、α2和α3，每个结构域包含大约有90个氨基酸；跨膜区的结构域由大约25个疏水氨基酸构成，带有一段带电的亲水氨基酸；胞内锚定的部分由30个氨基酸残基组成。其中，α1与α2具有相似的三级结构，α3与β2m具有相似的折叠。β2m以99个氨基酸的折叠与α链通过非共价键结合，无跨膜区。MHC I类分子中的α3与β2m靠近细胞膜，α3通过它的疏水跨膜部分和亲水的胞内部分镶嵌在细胞膜内。α1与α2形成整个分子的顶部，螺旋状结构域指向胞外，用于被TCR识别。

猪的MHC又称猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)，其基因组区域只有1.1Mb，是目前已知最小的哺乳动物MHC基因连锁群(Renard,et al.,Genomic,2006,88:96-100)。SLA位于猪的7号染色体上，分为class I、class II和class III三类区域基因。II类区域基因位于长臂上，I和III类区域基因位于短臂上，分别靠近端粒和着丝粒。

SLA-2基因是猪SLA-Ⅰ类分子重要的基因座，与SLA-1，SLA-3一起构成Ⅰ类分子的3个典型的功能基因群。

张念之等(J Virol,2011,22:11709-11724)最近解析了猪SLA-1*0401晶体结构。该研究中，SLA-1*0401和流感多肽S-OIV-NA449-457(NSDTVGWSW)及埃博拉病毒多肽Ebolavirus-vp35155-163(ATAAATEAY)成功获得晶体。

然而，到目前为止，猪SLA-2的晶体结构还未见报道。尤其缺乏口蹄疫病毒多肽与SLA I类分子形成晶体的研究。课题组长期研究猪SLAI类分子，并专注于口蹄疫病毒表位的设计和筛选。在前期研究的基础上，以实验室构建的荷包猪SLA-2重链和β2m轻链为蛋白，与一优化筛选出的亚洲I型口蹄疫病毒多肽表位在体外进行复性，并获得晶体，解析SLA-2晶体结构，为今后更加准确设计猪源病毒多肽表位提供科学依据。

发明内容

本发明的目的是：研究猪SLA-2与β2m与多肽形成的复合体空间结构，解析SLA-2空间结构，为今后详细研究SLA-2的抗原递呈功能提供了依据。