[发明专利]一种筛选砀山酥梨适宜授粉梨品种的方法

权利要求书

1.一种筛选砀山酥梨适宜授粉梨品种的方法，其特征在于，按如下步骤进行：

(1)提取授粉梨品种叶片的DNA；

(2)进行SCoT-PCR反应，对反应产物电泳检测，通过电泳结果，记录清晰而且可辨认的条带，计算遗传相似系数，进而进行聚类分析，构建授粉梨品种之间的亲缘关系聚类图；

(3)根据SCoT分子标记聚类分析结果，选取亲缘关系远、中、近的授粉品种树给砀山酥梨进行授粉；

(4)对每个授粉品种所结成熟果实果肉组织的石细胞团数目及面积进行显微观察、计算；并测定石细胞含量；

(5)通过步骤(4)的分析结果，筛选出最优亲缘关系授粉梨品种。

2.根据权利要求1所述的一种筛选砀山酥梨适宜授粉梨品种的方法，其特征在于，所述步骤(2)中SCoT-PCR反应体系为：模板DNA30mg/L，引物1.0μmol/L，dNTPs0.2mmol/L，TaqDNA聚合酶1.0U，10×EasyTaqBuffer(含2mmol/LMg²⁺)2.5μL，总体积为25μL；SCoT-PCR的反应程序为94℃预变性3min；94℃变性1min；50℃退火1min；72℃延伸2min；共35个循环；72℃延伸10min。

3.根据权利要求2所述的一种筛选砀山酥梨适宜授粉梨品种的方法，其特征在于，所述引物如下表所示：

4.根据权利要求2所述的一种筛选砀山酥梨适宜授粉梨品种的方法，其特征在于，所述步骤(3)中计算遗传相似系数，构建授粉梨品种之间的亲缘关系聚类图具体步骤为：在SCoT分子标记的电泳图谱的同一迁移位置上，有条带的定为“1”，无条带的定为“0”，做出0、1原始数字矩阵，得出SCoT分子标记扩增产物的总条带数目和多态性条带数目；使用软件NTsys2.10e，导入0、1数字矩阵，计算出遗传相似系数；使用UPGMA构建梨材料之间的亲缘关系聚类图。

5.根据权利要求1所述的一种筛选砀山酥梨适宜授粉梨品种的方法，其特征在于，所述步骤(4)中的成熟果实果肉组织是指切取距果皮2mm处的果肉组织，切取后迅速放入FAA固定液后置于4℃冰箱低温保存。

6.根据权利要求5所述的一种筛选砀山酥梨适宜授粉梨品种的方法，其特征在于，所述步骤(4)中石细胞团数目及面积的显微观察、计算，其步骤为：将步骤(4)FAA固定液中梨组织切片，置于载玻片上用0.1％番红染色；利用生物显微镜在100×放大倍数下观察，并采用其内置314万像素高分辨率嵌入式一体化数码成像系统拍照记录，观察并测定石细胞团的个数；并使用三点画圆工具计算出单个石细胞团面积。