[发明专利]糖化血红蛋白的测定方法、测定试剂和测定试剂盒

说明书

本申请是申请号为201280029249.4(国际申请号为 PCT/JP2012/065237)、中国国家阶段进入日为2013年12月13日(国际 申请日为2012年6月14日)、发明名称为“糖化血红蛋白的测定方法、 测定试剂和测定试剂盒”的中国发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及糖化血红蛋白的测定方法、测定试剂和测定试剂盒。

背景技术

糖化血红蛋白是在血红蛋白上结合葡萄糖而成的糖化物。血红蛋 白具有由α链、β链构成的四聚体结构，将β链的N末端糖化后的血 红蛋白称为血红蛋白A1c(以下也记作HbA1c)，血糖值越高越增加，因 此，作为糖尿病标志物而在临床检查中进行测定。

作为糖化血红蛋白的测定方法，已知HPLC法等色谱法、电泳法、 胶乳免疫凝集法等利用抗体的免疫测定法、使用作用于糖化蛋白的酶 和作用于糖化肽和/或糖化氨基酸的酶的酶测定法等。

作为糖化血红蛋白的酶测定法，已知如下方法(吸光度法)等：首先， 利用变性剂使含有血红蛋白的试样中的血红蛋白变性，使蛋白质分解 酶作用于变性后的血红蛋白，接着使糖化肽氧化酶作用于生成的糖化 肽，使生成的过氧化氢在过氧化物酶等过氧化活性物质存在下与氧化 显色型色原体反应而生成色素，由生成的色素的吸光度测定糖化血红 蛋白。

但是，利用该吸光度法的糖化血红蛋白的测定中，大量存在于试样中的血红蛋白的影响成为问题。作为针对该问题的解决方法，已知例如：使用阳离子型表面活性剂和/或两性表面活性剂的方法(专利文献I)、使用砜化合物和/或硝基化合物的方法(专利文献2、专利文献3)、使用四唑化合物的方法(专利文献4)、使用聚氧乙烯烷基醚硫酸盐类等特定的阴离子系表面活性剂的方法(专利文献5)等。

但是，这些方法中，也未必能够避免血红蛋白的影响，因而需要 不受血红蛋白影响的、准确地测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红 蛋白的方法。

另外，基于氧化还原反应的底物和酶的测定方法中，已知为了避 免还原剂、特别是抗坏血酸的妨碍而使用碘酸盐的方法(专利文献6)。 但是，还不知道为了避免血红蛋白的影响而使用碘酸盐等卤素氧化物 的方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平3-010696号公报

专利文献2：WO2003/107011小册子

专利文献3：日本特开2007-147630号公报

专利文献4：日本特开2000-210100号公报

专利文献5：WO2005/049858小册子

专利文献6：日本特开昭56-151358号公报

发明内容

发明所要解决的问题

本发明的目的在于提供用于不受血红蛋白的影响、准确且高灵敏 度地测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白的方法和试剂。

用于解决问题的方法

本发明人进行了深入的研究，结果发现了如下见解：在表面活性 剂存在下使蛋白质分解酶作用于含有血红蛋白的试样、然后使用果糖 基肽氧化酶进行作用的反应中，在卤素氧化物存在下进行该反应，并 对生成的过氧化氢进行测定，由此，能够不受血红蛋白的影响、准确 且高灵敏度地测定含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白，从而完成 了本发明。即，本发明涉及以下[1]～[18]项。

[1]一种含有血红蛋白的试样中的糖化血红蛋白的测定方法，其特 征在于，在表面活性剂存在下使蛋白质分解酶作用于含有血红蛋白的 试样、然后使用果糖基肽氧化酶进行作用的反应中，在卤素氧化物存 在下进行该反应，并对生成的过氧化氢进行测定。

[2]如[1]所述的方法，其中，卤素氧化物为选自由碘酸或其盐、 溴酸或其盐和高碘酸或其盐组成的组中的卤素氧化物。

[3]如[1]或[2]所述的方法，其中，表面活性剂为阳离子型表面活 性剂。

[4]如[3]所述的方法其中，阳离子型表面活性剂为选自由下述通式(I)表示的吡啶盐、下述通式(II)表示的盐和下述通式(III)表示的季铵盐组成的组中的阳离子型表面活性剂，