[发明专利]一种miRNA的组合制备抗非小细胞肺癌药物中的应用

说明书

本发明属于基因工程领域，特别涉及通过改变一组miRNA的表达水平促进抗非小细胞肺癌的肿瘤相关成纤维细胞向正常成纤维细胞的转化。这一组miRNA全新的组合是：miR‑1,miR‑206和miR‑31。通过在肺非小细胞肺癌的肿瘤相关成纤维细胞中同时过表达miR‑1/miR‑206,低表达miR‑31可以促进其向正常成纤维细胞的转化，从而在细胞和动物水平起到抗肿瘤的作用，具有潜在的抗肿瘤应用价值。

技术领域

本发明属于基因工程领域，特别涉及非小细胞肺癌肿瘤相关成纤维细胞向正常成纤维细胞转化方法的构建以及在抗肿瘤治疗中的应用

背景技术

成纤维细胞是人的组织和肿瘤的关键细胞成分，可以分为静息和活化的成纤维细胞。例如，所述成纤维细胞在伤口愈合部位能被高度的激活。活化的成纤维细胞侵入病变部位并产生细胞外基质(Extracellular matrixc,ECM)，充当一个其他细胞的支架。一旦伤口修复，活化的成纤维细胞恢复到静息的表型，这被称为正常成纤维细胞(NormalFibroblasts,NFs)。目前认为：肿瘤的发展不仅仅是由恶性癌细胞决定，也需要通过活化的肿瘤成纤维细胞或肿瘤相关成纤维细胞(Carci-noma-associated-fibroblast,CAFs)的参与。正常成纤维细胞(Normal Fibroblasts,NFs)与肿瘤相关成纤维细胞(Carci-noma-associated-fibroblast,CAFs)在形态学上差异不大，但是功能上确相差迥异，肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)可以通过分泌多种细胞因子，趋化因子和细胞外基质促进肿瘤细胞增殖和进展。生长因子，例如，血管内皮生长因子(VEGF)，转化生长因子(TGF)和成纤维细胞生长因子2(FGF2)，都具有促进肿瘤细胞长生的功能，而正常成纤维细胞(Normal FibroblastsNFs)确没有以上功能。因此如果能找到一种促进肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)向正常成纤维细胞(Normal Fibroblasts NFs)转化的方法，则可以使肿瘤细胞失去生长需要的各类细胞因子的支持，从而从另一途径起到抗肿瘤的作用。目前无论是抗肿瘤药物还是抗肿瘤治疗的方法多数是针对肿瘤细胞本身的，而针对肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)的治疗药物和方法基本是空白。本发明将从通过一种新的方法促进肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)向正常成纤维细胞(Normal Fibroblasts NFs)转化从而在非小细胞肺癌中起到抗肿瘤的作用。

微RNA(miRNA)是一类小的非编码RNA，在各种生理和病理过程中发挥重要的调节作用。越来越多的证据表明miRNA的不仅在癌细胞形成中过程中发挥作用，而且在成纤维细胞的转化及活化中起到调节作用。例如，miR-31，miR-214和miR-155重编程会促进卵巢癌的NF向CAF的转化。上调胃癌的CAF中miR-106b的表达水平可以促进胃癌细胞迁移和侵袭。miR-21被发现在大肠癌的CAF显著上调而后者有助于促进大肠癌的生长和侵袭。然而，在肺癌中，miRNA如何参与正常成纤维细胞(NFs)向肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)的转化仍然不清楚。

根据世界卫生组织(WHO)公布的资料显示，肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，列男性常见恶性肿瘤的第一位，列女性常见恶性肿瘤的第2、3位。非小细胞肺癌占所有肺癌的80％,三分之二以上的肺癌患者在诊断时已发生转移，往往失去手术机会，而针对肺癌的化疗药物效果亦欠佳，患者容易产生耐药，五年生存率低于5％，亟需寻找新的、有效的治疗肺癌的方法。以往研究往往集中于抗肿瘤细胞本身，越来越多的研究发现，肿瘤微环境在肿瘤形成是也发挥重要的作用。发明人发现通过改变miR-1,miR-206和miR-31的表达水平可以促进促进肺非小细胞肺癌的肿瘤相关成纤维细胞向正常成纤维细胞的转化，同样可以起到抗肿瘤的作用。这种新方法的制备在治疗非小细胞肺癌方面具有很好应用前景。

发明内容

发明目的

本发明的目的是提供全新的非小细胞肺癌肿瘤相关成纤维细胞向正常成纤维细胞转化的构建方法应用于非小细胞肺癌的抗肿瘤治疗