[发明专利]人副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型四重PCR检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明适用于病毒检测试剂盒技术领域，提供了一种人副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型四重PCR检测试剂盒及其检测方法。该试剂盒包括人副流感病毒特异性引物和基因探针，该检测方法使用上述人副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型四重PCR检测试剂盒进行检测。本发明人副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型四重PCR检测试剂盒及其检测方法与现有技术比较，能够同时检测人副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型，且具有灵敏度高、特异性强、周期短、准确度高等优点。

技术领域

本发明属于病毒检测试剂盒技术领域，尤其涉及一种人副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型四重PCR检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

实时荧光定量PCR在基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域都有广泛应用，其基本原理为：在PCR反应体系中引入一种荧光化学物质，随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断积累，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光信号强度，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，得到一条荧光扩增曲线图，如图1所示，在曲线指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，可进行定量分析。

人类副流感病毒(HPIVs)常常引起儿童下呼吸道感染的一种病毒，其致病性仅次于呼吸道合胞病毒(RSV)。与RSV一样，人类副流感病毒可以造成反复发作的上呼吸道感染(如感冒和喉咙痛)。它也能造成严重的反复感染的下呼吸道疾病(如肺炎，支气管炎和细支气管炎)，特别是在老年人中和有免疫缺陷人群中。人类副流感病毒是单链的RNA病毒。病毒表面含有溶合酶和红血球凝聚素-神经氨酸苷酶的醣蛋白。从血清学上人类副流感病毒可分为4型(Ⅰ型到Ⅳ型)，其中Ⅳ型又分a和b两个亚型。病毒颗粒大小不一(平均直径大小在150-300nm之间)，形态各异。人类副流感病毒的四种亚型各有不同的临床和流行病学特征。其中，Ⅰ型和Ⅱ型的最典型临床特征是造成儿童喉气管支气管炎，而Ⅰ型是这种儿童喉气管支气管炎的主要原因，Ⅱ型次之，此外，Ⅰ型和Ⅱ型均能造成其它的上呼吸道和下呼吸道疾病；Ⅲ型经常导致肺炎和细支气管炎；Ⅳ型很难检出，可能是因为它很少导致严重的疾病。人类副流感病毒的潜伏期一般在1-7天左右。

人副流感病毒存在于呼吸道分泌物中，通过人与人的直接接触和飞沫经呼吸道传播。对于成人，HPIV主要侵犯呼吸道黏膜的表层组织，在上皮细胞内增殖，引起的病变较轻，一般表现为上呼吸道感染(URI)。小于5岁的婴幼儿，病毒常侵犯气管、支气管黏膜上皮细胞，引起细胞变性、坏死增生和黏膜糜烂。当侵犯肺泡上皮及间质细胞，则引起间质性肺炎或表现为急性阻塞性喉气管支气管炎和肺炎。HPIV感染可产生局部抗体和血清抗体。人副流感病毒感染后人的免疫力下降，到目前为止，尚未找到有效的预防与特效治疗方法。

婴幼儿呼吸道感染是最常见的感染性疾病，主要由多种病毒引起，据统计大约30-40％的婴幼儿急性呼吸道感染都是副流感病毒引起的。副流感病毒引起的感染症状和流感病毒相似，仅依靠临床症状及常规的检测方法进行病毒病原的确定并不可靠。因此早期快速诊断呼吸道病毒感染能够及时指导临床治疗，为合理选择抗病毒、抗细菌药物提供依据，并在避免滥用抗生素方面具有重要意义。目前，检测病毒感染的方法很多，呼吸道病毒感染病毒学诊断方法主要包括病毒培养、免疫荧光技术、血清学试验、常规分子生物学方法等，以培养法为金标准。其中，病毒分离培养最为经典，过去常作为金标准，但该方法耗时、耗力，不能及时指导临床治疗，而且标本内所含病毒数量少可出现假阴性；电镜可检测病毒颗粒，但操作复杂、昂贵，不适用于临床；病毒核酸检测灵敏度高，但实验条件严格，容易被污染。病毒特异性抗体检测是临床常见的检测病毒感染的指标，但特异性IgG阳性只能表明有相应病毒感染，不能用于早期感染判断和疗效监测，IgM类抗体是感染早期或潜伏病毒活化时产生的，但婴幼儿可因免疫反应较弱而出现假阴性，且病毒特异性抗体检测一次只能检测一种呼吸道病毒。抗原检测较抗体检测更敏感，是快速而又准确的方法，被广泛引用于HPIV感染的快速诊断，但结果并不稳定，而且有些HPIV病毒株不容易被特异性单克隆抗体检测到。

发明内容