[发明专利]一种海藻共生菌及其制备间苯三酚的方法

说明书

本发明涉及一种能产生间苯三酚的海藻共生菌，并生产间苯三酚的方法。所述海藻共生菌筛选自具有产生间苯三酚能力的海洋野生菌株，并对其进行驯化和抗性基因改造，达到安全、环保、低能耗、高品质生产间苯三酚的目的。此种方法生产间苯三酚可以避免化学法生产中对环境的高污染和产物复杂品质差的缺点，也可以避免完全转基因生产间苯三酚的安全隐患，并且海洋来源的海藻共生菌可以利用资源丰富的海藻作为培养基，大大降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及一种能产生间苯三酚的海藻共生菌，并生产间苯三酚的方法。

背景技术

间苯三酚又称均苯三酚或1,3,5-苯三酚，别名斯帕丰(Spasfon)，俗称根皮苷酚，英文名称为phloroglucinol、m-trihydroxybenzene、Phloroglucinol dihydrate，简称为phl。间苯三酚及其衍生物在自然界中分布广泛，主要分布在植物和海洋植物中，是一种重要的医药中间体，具有良好的抗病毒、抗肿瘤、抗菌、消炎、止血及子宫收缩等药理活性。

目前已用于工业化大生产的均苯三酚的合成方法主要有4种：①三硝基甲苯法，最早由M.L.Kasrens等人开发出来，以2,4,6-三硝基甲苯(TNT)为原料，进行工业化生产间苯三酚。此法的优点是原料便宜、生产工艺成熟，存在的缺点是后处理较难、污染环境且原料存在安全隐患。②异丙苯法，简称TIP法，是由日本的Chiyoda开发出来的以1,3,5-三异丙基苯(TIP)为原料的工艺合成路线，此方法有点在于污染小，成本低。尽管此法经过后期不断改进和工艺优化，但是因为原料获得困难的问题，限制了该方法的推广应用。③苯胺法，以苯胺为原料，先合成三溴苯酚，再生成间苯三酚，或者直接以三溴苯酚为原料合成，该法收率高，成本低，原料来源广泛，价格相对较低，是合成间苯三酚的一种新型方法。缺点是路线长，影响因素较多，生产稳定性不够，并且溴水对设备有一定的腐蚀。④六氯苯法，1981年美国专利报道以六氯苯为原料合成间苯三酚。该方法反应条件温和，副产物少，成本较低，是合成间苯三酚的一种十分有效的方法。此路线的主要问题是酸分解，收率较低且废酸的处理困难，同时原料六氯苯毒性较大也是需解决的问题之一。目前，我国对间苯三酚的合成研究较少，大部分集中在化学有机合成。例如中国发明专利申请02137588.7，公开了一种合成均苯三酚的方法，其采用络合剂无水三氯化铝与1,3,5-三甲氧基苯进行络合反应，然后在浓盐酸中进行水解反应，水解液经冷却结晶得均苯三酚粗品。中国发明专利申请03128817.0公开以1,3,5-三甲基苯为原料，先在烃类有机溶剂中与路易斯酸反应形成中间体，然后经无机酸酸性水解、分层、水层结晶、再度结晶而制备均苯三酚的方法。这些化学合成方法虽然成本低，但是产物复杂，环境污染严重。

由于化学法存在各种弊端，生物合成法成为制备间苯三酚的潜在手段和研究热点。采用生物法具有原料来源丰富，安全环保，成本低等优点。

生物法合成间苯三酚的研究主要是基于发现phlD基因是控制产生间苯三酚的关键基因，因此，目前的很多研究通过将phlD基因转化到大肠杆菌体内进行异源表达，并利用大肠杆菌细胞内的生物酶体系和原料来合成间苯三酚。