[发明专利]格氏乳球菌细菌素及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)细菌素的制备方法，其特征在于，所述格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)细菌素由保藏编号为CCTCC NO:M 2015633的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)的发酵液提取得到，包括以下步骤：

(1)格氏乳球菌的活化：将格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)在营养肉汤中活化；

(2)格氏乳球菌的发酵培养：将活化后的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)接种于培养基中进行发酵培养，得发酵液；

(3)细菌素的提取：调节步骤(2)得到的发酵液的pH值为8.8～9.6，放置1h～4h后离心，收集菌体；将菌体悬浮于蒸馏水中，调节pH为4.7～6.5，振荡1h～4h后离心，收集上清液；将上清液浓缩，冷冻干燥，即得到所述格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)细菌素；步骤(2)所述培养基为改良的M17培养基，其成分为：L-阿拉伯糖0.1g～5g，植物蛋白胨5g～10g，酵母粉5g～10g，聚蛋白胨3g～7g，抗坏血酸0.3g～0.7g，牛肉膏1.0g～2.0g，MgSO₄·7H₂O0.005g～0.015g，β-甘油磷酸二钠5g-15g，蒸馏水1000mL。

2.根据权利要求1所述的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)细菌素的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述改良的M17培养基的成分为：L-阿拉伯糖0.1g，植物蛋白胨5g，酵母粉5g，聚蛋白胨5g，抗坏血酸0.5g，牛肉膏1.5g，MgSO₄·7H₂O 0.01g，β-甘油磷酸二钠10g，蒸馏水1000mL。

3.根据权利要求1或2所述的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)细菌素的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述活化的时间为12h～48h，活化的温度为32℃～45℃，活化的转速为100rpm～280rpm。

4.根据权利要求1或2所述的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)细菌素的制备方法，其特征在于，步骤(2)将活化后的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)按体积比为0.5％～10.0％的接种量接种于培养基中进行发酵培养，发酵培养的时间为12h～144h，温度为25℃～45℃，转速为100rpm～280rpm。

5.根据权利要求4所述的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)细菌素的制备方法，其特征在于，步骤(2)将活化后的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)按体积比为10.0％的接种量接种于培养基中进行发酵培养，发酵培养的时间为144h，温度为32℃，转速为240rpm。

6.根据权利要求1或2所述的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)细菌素的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述细菌素的提取的方法为：调节步骤(2)得到的发酵液的pH值为8.8，4℃下放置1h后离心，收集菌体；将菌体悬浮于蒸馏水中，调节pH为4.7，在4℃下振荡1h后离心，收集上清液；将上清液浓缩至原体积的1/2，冷冻干燥，即得到所述格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)细菌素。

7.一种格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)细菌素，其特征在于，由权利要求1-6任一项所述的制备方法制备而得。

8.权利要求7所述的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)细菌素在制备细菌抑制剂、真菌抑制剂以及生物防腐剂中的应用，所述细菌为革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌，所述真菌为酵母、霉菌。

9.权利要求7所述的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)细菌素在制备防治急性肠炎或慢性肠炎的药物中的应用。