[发明专利]一种葫芦巴碱粗提取物的制备方法

说明书

本发明公开了一种基于微波辅助提取法和大孔吸附树脂法从云南小粒种生咖啡豆中制备葫芦巴碱粗提取物的方法，包括，提取步骤，称取生咖啡豆粉碎物，按料液比1:25，加入体积分数为30％～70％的乙醇溶液，微波辅助提取5～40秒钟，过滤，得到固体滤渣和葫芦巴碱提取液，同法重复提取1次，合并提取液；分离纯化步骤，将提取液回收溶剂至干，以一定量水溶液溶解分散，上样于AB‑8型大孔吸附树脂上，依次以4～6倍柱体积量的去离子水，20％乙醇，无水乙醇洗脱，收集20％洗脱液，减压回收溶剂并冷冻干燥，得葫芦巴碱质量分数不低于5.0％的固体粉末，即得。

技术领域

本发明涉及植物的提取和分离，具体涉及一种葫芦巴碱粗提取物的制备方法。

背景技术

咖啡豆是茜草科咖啡属的常绿灌木咖啡(Coffea arabica)的果实除去果肉之后的豆状种子，原产非洲。我国主要种植阿拉伯小粒种咖啡的两个变种。自20世纪90年代起，云南地区逐渐将咖啡作为重点发展的产业之一。目前咖啡豆主要应用于食品饮料领域，现代药理研究显示，咖啡豆中主要活性成分之一的葫芦巴碱具有降血糖、抗肿瘤、促进神经组织再生、降低胆固醇等作用，还可以作为脑部和皮肤治疗药物的有效载体，药理作用显著，无明显的不良反应。目前对咖啡豆的化学研究主要为对其所含生物碱之一咖啡因以及对多酚类物质的提取分离及分析，对其中含量仅次于咖啡因的生物碱类成分葫芦巴碱的研究较少，仅限于分析方法的研究。据文献报道，葫芦巴碱在很多植物中都有分布，如在葫芦巴中的质量百分含量约为0.13-0.5％，在大豆中的质量百分含量约为0.048％，在苜蓿中的质量百分含量约为12％(孙广玉等，大豆和苜蓿种子中葫芦巴碱含量的测定，植物生理学通讯，2006，42(6)：1153-1155)；而葫芦巴碱在生咖啡豆中的质量百分含量约为0.5-1％，开发前景广阔。

微波辅助提取法是近些年发展起来的一种提取技术，其在中药有效成分提取领域中的优势在于：(1)选择性好。微波萃取过程中由于可以对萃取物质中不同组份进行选择性的加热，因而能使目标物质直接从基体分离。(2)微波具有极强的穿透力，能使天然植物的细胞壁和细胞膜快速破碎，使萃取剂容易进入细胞内。(3)加热效率高，有利于萃取热不稳定物质，可以避免长时间高温引起样品的分解。(4)仪器设备简单、低廉，适应面广。(5)试剂用量少，萃取率高，节时、节能、污染小。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种从云南小粒种生咖啡豆中制备葫芦巴碱粗提取物的方法，该方法基于微波辅助萃取法，优化了从生咖啡豆中提取葫芦巴碱的工艺，并采用大孔吸附树脂柱法分离纯化，得到葫芦巴碱粗提取物。

一种从云南小粒种生咖啡豆中制备葫芦巴碱粗提取物的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1、提取：称取生咖啡豆粉碎物，按料液比1:25，加入体积分数为30％～70％的乙醇溶液，微波辅助提取5～40秒钟，过滤，得到固体滤渣和葫芦巴碱提取液，同法重复提取1次，合并提取液；

S2、分离纯化：将提取液回收溶剂至干，以一定量水溶液溶解分散，上样于AB-8型大孔吸附树脂上，依次以4～6倍柱体积量的去离子水，20％乙醇，无水乙醇洗脱，收集20％洗脱液，减压回收溶剂并冷冻干燥，得葫芦巴碱质量分数不低于5.0％的固体粉末，即得。

优选的，步骤S1中，所述料液比为1:25，提取溶剂为体积分数30～70％的乙醇溶液，微波辅助提取时间为5～40秒钟。

更优选的，步骤S1中，所述料液比为1:25，提取溶剂为70％乙醇，提取时间为30秒钟。

优选的，步骤S2中，所述分离过程以大孔吸附树脂柱进行分离纯化。

优选的，步骤S2中，所述洗脱液依次为去离子水，20％和无水乙醇。

优选的，步骤S2中，所述洗脱液洗脱体积为4～6倍柱体积，收集20％乙醇洗脱液经减压干燥，得葫芦巴碱质量分数不低于5.0％的固体物。