[发明专利]用于肺癌诊断的试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明属于生物样品检测领域，涉及肺癌患者标志物及其应用。

背景介绍

肺癌是当今世界上最常见也是死亡率最高的癌症之一,它是男性癌症患者中最主要的癌症类型,占新增癌症病例总数的17％和癌症死亡病例的23％,而且在北美、欧洲部分地区和中国也是女性最常见的癌症死亡类型。据估计,2012年有226160例被诊断为肺癌的新增病例,其中160340例将死于肺癌。有超过一半的肺癌患者(56％)在确诊时或者已处于进展期，或者已发生远处转移,即使辅以化疗,生存期仍只有一年或更短。因此肺癌的早期发现和鉴别诊断非常重要。在肺癌的所有病理类型中,非小细胞肺癌(NSCLC)占80-85％，肺癌的早期阶段通过手术切除可以最大可能地实现长期生存。目前，临床所使用肺癌筛查诊断方法主要是胸部X射线检查、CT扫描等影像学技术。虽然这些影像资料对诊断起着重要作用，但也存在很多局限性，例如假阳性率高，无法检出隐性病灶、亚临床病灶和微小转移病灶。除此之外，对肺癌的诊断方法还包括支气管镜检查、穿剌活检等有创操作，这类方法耗时长，增加患者痛苦。因此，寻找无创、无辐射、费用低廉、诊断快速且敏感性、特异性均高的筛查、诊断方法，是目前肺癌早期诊断的迫切需求。

肿瘤标志物是指肿瘤细胞或者组织由于癌基因或其他肿瘤相关基因及其产物异常表达所产生的生物活性物质或其本身由癌组织脱落，而在正常组织或良性疾病时有一定程度表达或产量甚微。它反映了癌的发生发展过程，可在肿瘤患者组织、体液及排泄物中检出，广泛应用于肿瘤的诊断，监测复发、转移，预后，预测疗效等。临床上现有的广泛受到认可的几种主要标志物为：应用于卵巢癌的肿瘤抗原125(CA125)，应用于胰腺癌的类抗原19-9(CA19-9)，应用于结直肠癌的癌胚抗原(CEA)和应用于前列腺癌的前列腺特异性抗原(PSA)。而其他癌症例如乳腺癌和肺癌，目前仍然缺少用于筛查的可信的肿瘤标志物。

目前已经应用于肺癌临床辅助诊断的标志物只有蛋白标志物，为下列几种：

(1)CEA:Gold和Freeman在1965年首先在大肠癌中发现CEA，它是一种糖蛋白，分子量为180KD,半衰期为3-4天，是胚胎发展过程产生的抗原，出生后显著下降；其特异性不强，但可用于肿瘤发展的监测、疗效判断和预后估计，对于早期诊断并不敏感；肺癌病人虽有升高，但存在较高的假阴性和假阳性，不适于在肺癌筛查诊断中单独使用；

(2)CA125:Bast在1981首先发现CA125这种大分子糖蛋白，其半衰期约4.8天，主要应用于卵巢癌，同时在肺癌中也有上升；

(3)CYFRA21-1(CYFRA211)：CYFRA211是细胞角蛋白19的水溶性片段，半衰期约4天；

虽然目前以上蛋白标记物已经用于肺癌的辅助诊断，但其诊断效率低下，达不到临床需求。

此外，现有技术多采用电化学发光免疫测定法(ECLI)或放射免疫测定法(RIA)来检测标志物，虽然ECLI操作简单、快速且具有较高的灵敏度和特异度，但检测成本相对较高；RIA则有放射性，对人体有害。相比之下，酶联免疫吸附法(ELISA)的设备和操作更为简单、实验成本较低，但其敏感性和特异性较差(何国坚等人，电化学发光免疫分析法检测维生素D试剂盒性能验证。中国医药指南，第12卷第23期，2014年8月)。因此,临床亟需找到一种具有高敏感性和高特异性并且成本低廉的肺癌早期诊断方法。

催乳素(Prolactin，简称PRL，又叫促乳素或催乳激素)是一种由垂体前叶腺嗜酸细胞分泌的蛋白质激素。主要作用为促进乳腺发育生长，刺激并维持泌乳，还有刺激卵泡LH受体生成等作用。本发明人研究发现，早期肺癌患者中的血浆催乳素水平明显高于正常人群，能够作为肺癌的诊断标志物。

发明内容

本发明旨在提供一种具有高敏感性和高特异性且成本低廉的临床检测方法，以在人类受试者特别是中国人群中早期并可靠地诊断肺癌。

总体而言，本发明涉及用于诊断肺癌的方法和试剂盒，其包括检测受试者的催乳素水平特别是血浆催乳素水平，以鉴定所述受试者是否患有肺癌或处于患有肺癌的风险中。本发明还涉及检测受试者血浆中癌胚抗原和细胞角蛋白19的水平，以与所述受试者血浆中催乳素的水平联合用于诊断肺癌。

在一个方面，本发明涉及用于诊断肺癌的方法，其包括检测受试者的催乳素水平，以鉴定所述受试者是否患有肺癌或处于患有肺癌的风险中。