[发明专利]一种多肽固相合成的监测方法

权利要求书

1.一种多肽固相合成的监测方法，其特征在于，

以高效液相色谱法对脱保护反应的反应液中的反应产物进行检测，确定多肽固相合成脱保护步骤完成情况；

和/或以高效液相色谱法对氨基酸缩合反应的反应液中保护氨基酸的含量进行检测，确定氨基酸缩合反应的完成情况。

2.根据权利要求1所述的监测方法，其特征在于，若脱保护反应的反应液中检测不到反应产物和/或反应产物的产生量与树脂的载量一致，则说明反应已经完全。

3.根据权利要求1或2所述的监测方法，其特征在于，所述脱保护反应为以脱保护试剂对连接在树脂上的Fmoc保护基团进行脱保护。

4.根据权利要求3所述的监测方法，其特征在于，所述脱保护试剂为哌啶、哌嗪、二乙胺中至少一种，所述脱保护次数至少为一次。

5.根据权利要求4所述的监测方法，其特征在于，脱保护试剂为哌啶，采用Fmoc-Piperidine作为对照品，高效液相色谱法检测脱保护反应的反应液中Fmoc-Piperidine的浓度，进而通过检测二次脱保护反应的反应液中是否存在Fmoc-Piperidine判断脱保护反应的完成情况。

6.根据权利要求5所述的监测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法检测脱保护反应的反应液中Fmoc-Piperidine的浓度的色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以0.1％TFA-水溶液为流动相A相，0.1％TFA-乙腈溶液为流动相B相，流速为1.0mL/min，25℃，检测波长为220nm，梯度洗脱。

7.根据权利要求4所述的监测方法，其特征在于，脱保护试剂为哌嗪、二乙胺中至少一种或哌啶与其他脱保护试剂的混合物，通过检测二次脱保护反应的反应液中是否存在对应的反应产物判断脱保护反应的完成情况。

8.根据权利要求1所述的监测方法，其特征在于，若氨基酸缩合反应的反应液中保护氨基酸的减少量与树脂的载量值一致且浓度不再降低时，则说明反应已经完全。

9.根据权利要求8所述的监测方法，其特征在于，所述保护氨基酸为Fmoc保护的任意一种氨基酸或氨基酸类似物。

10.根据权利要求8或9所述的监测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法具体为以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以0.1％TFA-水溶液为流动相A相，0.1％TFA-乙腈溶液为流动相B相，流速为1.0mL/min，30～35℃检测波长为220nm，梯度洗脱。