[发明专利]一种天然脱落酸的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物发酵——生物化学农药生产领域，具体属于一种天然脱落酸的分离纯化方法。

背景技术

脱落酸是一种具有全面生理功能的内源植物激素，是五大植物激素之一，是植物重要生长调节剂，是平衡植物内源激素和有关生长活性物质代谢的关键因子，具有促进植物平衡吸收水、肥和协调体内代谢的能力，可有效调控植物的根/冠和营养生长与生殖生长，对提高农作物的品质、产量具有重要作用。脱落酸是一个市场前景非常好的产品，在农业生产上有广阔的应用前景，能产生巨大的经济效益和社会效益。目前脱落酸在市场上的价格依然很高，2005年，美国Sigma公司的98%天然脱落酸（商品号A4906-1MG）1毫克价格为人民币3600元，无论是在国内还是国际市场，脱落酸产品都将会长期处于供不应求的局面。

目前，常用的脱落酸生产方法为生物发酵法，该方法降低了天然脱落酸的生产成本，但存在收率低的缺陷，如何高效率、低成本的从发酵液中提取得到高纯度的天然脱落酸成为研究重点。

发明内容

本发明针对目前天然脱落酸纯化效率低、成本高的不足，提供一种收率高，成本低的天然脱落酸的分离纯化方法。

本发明的具体技术方案如下。

一种天然脱落酸的分离纯化方法，依次包含以下步骤：

（1）脱落酸发酵液经板框过滤得到板框滤液；

（2）板框滤液用超滤膜处理，得到超滤浓缩液和超滤透析液；

（3）超滤透析液通过浓缩膜进行浓缩，得到膜浓缩液；

（4）膜浓缩液经酸化后萃取，萃取液经预处理后添加洗脱剂，经吸附柱层析吸附杂质后得到层析液；

（5）层析液减压浓缩，冷却结晶，过滤、干燥得到脱落酸产品。

步骤（1）中板框滤液pH调至4.8-7.0。

步骤（2）中超滤膜的截留分子量为3000-30000。

步骤（3）中浓缩膜为反渗透膜或纳滤膜或两者的结合。

步骤（3）中浓缩膜的截留分子量为50-200。

步骤（4）中萃取的萃取剂为乙酯类、丁酯类、异戊酯类中的一种或几种。萃取液预处理为将萃取液浓缩至浓度为60-120mg/ml。洗脱剂优选为氯仿、二氯甲烷、石油醚、正己烷中的一种或几种。

步骤（4）中吸附柱层析的吸附剂可为氧化铝、硅胶、硅酸镁中的一种或几种。

步骤（5）中所述的减压浓缩，其真空度可优选为-0.08~-0.095Mpa，夹套循环水温度可优选为45~60℃，料温可优选为30~40℃。

步骤（5）中层析液经减压浓缩，浓缩液中可通过添加非极性溶剂促进母液再次析出粉，增加脱落酸产品的一次产率。非极性溶剂优选为己烷、石油醚、三氯甲烷、四氯化碳，其比例为层析浓缩液体积的0.7~1.0倍。

本发明的有益效果为：本发明的方法简单、方便，从发酵液中提取脱落酸纯度高、收率高，母液中产品残留少。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1。

脱落酸发酵液经板框过滤得到板框滤液，pH调至4.9，用截留分子量为3000的超滤膜处理，得到超滤透析液，超滤透析液通过截留分子量为100的纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液，浓缩液经酸化后加乙酯萃取，将萃取液浓缩至60mg/ml，然后添加二氯甲烷，经硅胶柱层析吸附杂质，得到的层析液减压浓缩，真空度为-0.084Mpa，夹套循环水温度为60℃，料温为40℃，冷却结晶、过滤、干燥得到含量为96%的脱落酸产品。

实施例2。

脱落酸发酵液经板框过滤得到板框滤液，pH调至5.5，用截留分子量为5000的超滤膜处理，得到超滤透析液，超滤透析液通过截留分子量为150的纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液，浓缩液经酸化后加丁酯萃取，将萃取液浓缩至70mg/ml，然后添加石油醚，经氧化铝柱层析吸附杂质，得到的层析液减压浓缩，真空度为-0.09Mpa，夹套循环水温度为58℃，料温为38℃，浓缩结束后加入0.8倍的己烷，冷却结晶、过滤、干燥得到含量为95.2%的脱落酸产品。

实施例3。