[发明专利]一种基于磁珠法的动物组织DNA提取试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种基于磁珠法的动物组织DNA提取试剂盒，可应用于多个物种动物组织DNA提取，也可应用于同个物种不同组织的DNA提取。本发明还涉及应用该试剂盒从动物组织样本中提取DNA的方法。

背景技术

真核生物基因组DNA广泛应用在动植物的遗传育种、基因图谱的构建、品种鉴定、物种形成和系统演化等方面的研究中。无论是基因工程还是蛋白质工程，核酸分子都是这些技术应用所涉及的主要对象，所以DNA的分离与提取是分子生物学研究中重要的基本技术。

目前对于动物全基因组DNA的提取已有很多的研究和报道，但是选取何种方法能够更有效地提取更高质量的基因组DNA，还是一个值得解决的问题。动物DNA的提取通常采用经典提取方法，即酚抽提法、异丙醇沉淀法以及甲酰胺裂解法，后来许多方法的改进都是在这三种方法的基础上进行的。这三种方法均利用蛋白酶K和十二烷基硫酸钠（SDS）消化破碎细胞。采用上述经典方法获得的DNA纯度很高，能够满足各种实验的要求，但操作繁琐且用时长，还需要用到多种仪器设备。

相比传统的DNA提取方法，以磁珠为载体的新型分离技术，无需大量检材，也无需接触酚/氯仿等有毒试剂，且操作简单方便，很容易实现自动化操作，基于磁珠法的核酸提取具备传统DNA提取无法比拟的优势，是未来核酸提取发展的重要方向。鉴于DNA提取的技术现状与发展前景，需要研发多种基于磁珠法的新型DNA提取试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于克服现有DNA提取技术的不足，提供了一种基于磁珠法的动物组织DNA提取试剂盒及其应用，该技术方案将磁珠法与传统的动物DNA提取中的裂解液相结合，具有操作简单快速、使用安全、提取效率高、实现成本低的特点。为了实现上述技术目的，本发明试剂盒的技术方案为：

一种动物组织DNA提取的试剂盒，试剂包括裂解液、结合液、洗涤液和核酸洗脱液，所述洗涤液包括洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ和洗涤液Ⅲ；所述裂解液含有十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸、三羟甲基氨基甲烷、氯化钠和曲拉通X-100；所述结合液含有异丙醇；所述洗涤液Ⅰ含有盐酸胍、乙二胺四乙酸、三羟甲基氨基甲烷、氯化钠和异丙醇；所述洗涤液Ⅱ含有乙酸钠和异丙醇；所述洗涤液Ⅲ含有异丙醇；所述核酸洗脱液含有三羟甲基氨基甲烷。

优选地，在所述裂解液中，十二烷基硫酸钠的浓度为0.5%-3%（m/v），乙二胺四乙酸的浓度为10-40mmol/L，三羟甲基氨基甲烷的浓度为10-40mmol/L，氯化钠的浓度为1-5mol/L，曲拉通X-100的浓度为0.5%-3%（v/v），余量皆为去离子水；使用氢氧化钠和盐酸调节所述裂解液的pH值为7.0-9.0。更为优选地，所述十二烷基硫酸钠的浓度为2%（m/v），所述乙二胺四乙酸的浓度为20mmol/L、所述三羟甲基氨基甲烷的浓度为20mmol/L，所述氯化钠的浓度为1.4mol/L，所述曲拉通X-100的浓度为1%（v/v），裂解液的pH值调节为8.0。

优选地，在所述结合液中，所述异丙醇为分析纯，浓度大于99.9%。

优选地，在所述洗涤液Ⅰ中，盐酸胍的浓度为2-10mol/L，乙二胺四乙酸的浓度为10-40mmol/L，三羟甲基氨基甲烷的浓度为10-40mmol/L，氯化钠的浓度为1-5mol/L，异丙醇的浓度为50%-70%（v/v），余量皆为去离子水；使用氢氧化钠和盐酸调节所述所述洗涤液Ⅰ的pH值为7.0-9.0。更为优选地，所述盐酸胍的浓度为5mol/L，所述乙二胺四乙酸的浓度为20mmol/L，所述三羟甲基氨基甲烷的浓度为20mmol/L，所述氯化钠的浓度为1.4mol/L，所述异丙醇的浓度为50%（v/v），洗涤液Ⅰ的pH值调节为8.0。

优选地，在所述洗涤液Ⅱ中，乙酸钠的浓度为1-5mol/L，异丙醇的浓度为50%-80%（v/v）。更为优选地，所述乙酸钠的浓度为5mol/L，所述异丙醇的浓度为80%（v/v）。

优选地，在所述洗涤液Ⅲ中，异丙醇的浓度为50%-100%（v/v）。更为优选地，所述异丙醇的浓度为80%（v/v）。

优选地，在所述核酸洗脱液中，三羟甲基氨基甲烷的浓度为1-4mmol/L；使用氢氧化钠和盐酸调节所述核酸洗脱液的pH值为7.0-9.0。更为优选地，所述三羟甲基氨基甲烷的浓度为2mmol/L，所述核酸洗脱液的pH值调节为8.0。

本发明还提供两种上述试剂盒的应用方法，方法一的技术方案为，包括如下步骤：

①在EP管中加入动物组织、裂解液和蛋白酶K并匀浆，于56℃水浴孵育30分钟后离心；