[发明专利]miR-34a沉默表达重组载体及其应用

说明书

本发明涉及miR‑34a基因在制备治疗阿尔茨海默病神经精神障碍或焦虑症的药物中的用途，所述miR‑34a基因如序列1所示。本发明另外涉及抑制miR‑34a表达的tud‑mir34a和含有tud‑mir34a的miR‑34a沉默表达重组载体。本发明利用tud‑mir34a构建miR‑34a沉默重组载体并抑制miR‑34a在AD小鼠海马脑组织中大的表达，确定miR‑34a抑制可显著改善AD转基因小鼠焦虑障碍样行为学障碍。

技术领域

本发明涉及miR-34a沉默表达重组载体及其应用。

背景技术

microRNA是一类长度约为22～25个核苷酸的单链短序列小RNA，它不编码蛋白质，但能以其5’末端第2～8位核苷酸以非完全性碱基配对的方式结合于同源mRNA的3’UTR(3’非转译区)，通过抑制mRNA的表达或是诱导其降解，对mRNA进行负性调控，影响相关蛋白的生成。microRNA-34a(miR-34a)是microRNA的一种，它在脑组织、心肌、肺、肝脏、前列腺等全身各部位组织中广泛表达，成熟micRNA34a序列如序列1所示，在体内先形成micRNA34a的前体序列，然后体内加工形成了成熟的micRNA34a。其编码基因定位于1号染色体长臂3区6带(1p36)，染色体(1p36)部位的缺失可发生于多种肿瘤细胞中，如神经母细胞瘤、肝癌、结直肠癌等，因此，miR-34a常被用于研究在肿瘤发生中所起的作用；此外，miR-34a可以与多种基因的mRNA非特异性结合，如MYCN、BCL 2、SIRT 1、NOTCH 1、JAG 1、CCND 1、CDK 6以及E2F3等，这些基因参与体内各种生物过程如肿瘤发生及恶性转移、神经发生及分化、血管生成、细胞凋亡及坏死等，miR-34a因此也被广泛地用于研究在肿瘤中所起的作用。

然而，关于miR-34a在阿尔茨海默病或焦虑症中所起的作用现有技术中尚未见报道。

发明内容

本发明针对miR-34a来设计抑制miR-34a表达的tud-mir34a，利用tud-mir34a构建miR-34a沉默重组载体并抑制miR-34a在AD小鼠海马脑组织中大的表达，确定miR-34a抑制可显著改善AD转基因小鼠焦虑障碍样行为学障碍。研究结果显示，该重组载体在整体动物水平成功高效表达，并显著改善AD转基因小鼠焦虑样障碍。本研究结果不但为深入研究miR-34a的功能提供新的技术手段，同时为AD神经精神障碍如焦虑样障碍靶向基因治疗提供了新的候选策略。

因此，本发明的一个目的是提供miR-34a基因在制备治疗阿尔茨海默病神经精神障碍或焦虑症的药物中的用途，所述miR-34a基因如序列1所示。

本发明的另一个目的是提供一种抑制miR-34a表达的tud-mir34a，其基因序列如序列2所示。

本发明的再一个目的是提供miR-34a沉默表达重组载体，其含有序列2所示的基因序列。

本发明还提供了构建miR-34a沉默表达重组载体的方法，该方法包括：(A)合成tud-mir34a，其序列如序列表中序列2所示；(B)将合成的tud-mir34a和载体进行酶切，将酶切的tud-mir34a和载体连接；(C)转化大肠杆菌，鉴定后提取重组质粒并进行包装。

本发明进一步提供了碱基序列如序列2所示的tud-mir34a或含有tud-mir34a的miR-34a沉默表达重组载体在制备治疗阿尔茨海默病神经精神障碍或焦虑症的药物中的用途。

本发明的优点

本发明设计了抑制miR-34a表达的tud-mir34a，利用其有效构建miR-34a沉默载体，并在脑组织中成功抑制miR-34a的表达；同时确定miR-34a的抑制可显著改善AD转基因小鼠焦虑样障碍。

附图说明

图1为酶切鉴定结果图。