[发明专利]用于检测2型糖尿病视网膜病变的miR-3197分子标记物及其扩增引物和应用

说明书

本发明公开了用于检测2型糖尿病视网膜病变的miR‑3197分子标记物及其扩增引物和应用，特点是分子标记物为miR‑3197分子标志物，其核苷酸序列为5’GGAGGCGCAGGCUCGGAAAGGCG‑3’，其正向扩增引物的核苷酸序列为5’‑GGA GGC GCA GGC TCG GAA‑3’，可应用于检测2型糖尿病视网膜病变的试剂盒中，优点是检测效率高，针对性强，可用群2型糖尿病视网膜病变的辅助诊断、检测或筛查药物中。

技术领域

本发明涉及一种miRNA分子标记物，尤其是涉及一种用于检测2型糖尿病视网膜病变的miR-3197分子标记物及其扩增引物和应用。

背景技术

2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus，T2DM）又名非胰岛素依赖性糖尿病，是糖尿病最主要的类型，约占90%（23499527）。是一组以慢性高血糖为特征的多因素代谢异常综合征，它是全球性主要致死、致残及耗费巨大的疾病之一。糖尿病性视网膜病变(Diabeticretinopathy,DR)作为糖尿病最严重的微血管并发症之一，已成为糖尿病患者致盲的首位原因，目前全球 DR 患者约 9300 万（22301125）。我国糖尿病患者 9240 万，居全球第一位，其中 DR 患病率为 37％（20335585）。且随着糖尿病发病率的增加和人均寿命的延长，DR的患病率正不断增加，提示未来DR将是视力丧失和视功能损害的主要原因。糖尿病视网膜病变诊断的金标准是眼底荧光血管造影 ，但其是侵入性检测，具有创伤性，并且价格昂贵，费时。因此，寻找一些生物标记物预测或警示DR的发生，对降低其致盲率有着重要的意义。

目前，已有研究表明循环miRNAs是一类具有潜在临床诊断价值的新型生物标志物。但目前，国内外还没有公开任何关于利用miRNA分子作为检测2型糖尿病视网膜病变预测或诊断的分子标记物来检测2型糖尿病视网膜病变的相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于检测2型糖尿病视网膜病变的miR-3197分子标记物及其扩增引物和应用，其中循环miR-3197表达水平与2型糖尿病性视网膜病变患病率呈正相关，检测效率高，针对性强。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种用于检测2型糖尿病视网膜病变的miR-3197分子标记物，所述的miRNA分子标记物为miR-3197分子标志物，分子标记物miR-3197基因片段的核苷酸序列为5’GGAGGCGCAGGCUCGGAAAGGCG-3’。

上述miR-3197分子标志物的正向扩增引物的核苷酸序列为5’-GGA GGC GCA GGCTCG GAA -3’，其反向扩增引物为通用引物。

一种用于检测2型糖尿病视网膜病变的试剂盒，该试剂盒包括扩增上述miR-3197基因片段的正向扩增引物：5’-GGA GGC GCA GGC TCG GAA -3’以及cel-miR-39内参基因的正向扩增引物的核苷酸序列为：5’-CGTGAGTCGATCCATATTGTA-3’。

一种利用上述miR-3197分子标记物检测2型糖尿病视网膜病变的检测方法，步骤如下：

a、总RNA的提取；

b、采用miScript® II RT Kit试剂盒对miRNA进行反转录；