[发明专利]一种提高灵芝液体发酵中三萜含量的方法

说明书

本发明涉及一种提高灵芝液体发酵中三萜含量的方法，包括配制CaCl₂水溶液和水杨酸乙醇溶液、菌丝液体培养、钙离子和水杨酸诱导、菌丝收集、菌丝三萜提取与检测。在灵芝液体发酵过程中加入钙离子和水杨酸进行诱导，能够显著提高灵芝菌丝中三萜的含量，菌丝的三萜含量达48.97 mg/g，比对照组高48.26%，有效提高灵芝的质量，而且操作方法简单、成本低。

技术领域

本发明涉及一种提高食用菌液体发酵中三萜含量的方法，具体涉及一种提高灵芝液体发酵中三萜含量的方法。

技术背景

灵芝[Ganoderma lucidum（Curtis：Fr.）P.Karst]古称为瑞草，又名为赤芝、万年蕈、红芝、灵芝草等,在真菌的分类地位上属于真菌界（Mycota），担子菌亚门（Basidiomycotina）,层菌亚纲（Hymenomycetes），非褶菌目（Aphyllophorales），多孔菌科（Polyproraceae），灵芝属（Ganoderma）。灵芝三萜具有良好的药理作用，主要表现在抑制癌细胞的生长、保肝护肝、降血压、抗HIV等。

灵芝品质的好坏与灵芝三萜的含量着密切相关。目前生产上获得灵芝三萜类化合物的来源主要是成熟子实体和液体发酵的菌丝。通过液体发酵技术来提取灵芝的三萜的周期较短，且操作简单。随着市场上灵芝产品的不断推出，就要求更加高效地生产灵芝三萜。因此，探索如何有效提高灵芝液体发酵中三萜的含量，具有广泛的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高灵芝液体发酵中三萜含量的方法，适应市场需求，也为灵芝有效成分分析提供依据。

本发明的一种提高灵芝液体发酵中三萜含量的方法，操作步骤如下：

（1）配制CaCl₂水溶液和水杨酸乙醇溶液：用CaCl₂和无菌水配制10mM钙离子水溶液；用水杨酸和乙醇，配制150µM水杨酸乙醇溶液；

（2）菌丝液体培养：用9mm打孔器从长满灵芝菌丝的平板上打出8块菌丝接入100mL液体PDA中，28℃，150rpm摇床培养6-7天，然后再静置培养5-6天；所述液体PDA配方为：200 g马铃薯煮沸浸出液，20 g葡萄糖，加水定容到1000mL，121℃灭菌30min；

（3）钙离子和水杨酸诱导：取步骤（1）的钙离子水溶液1-5mL和水杨酸乙醇溶液0.5-1.5mL，混匀，采用滤膜除菌法加入到步骤（2）已接种培养的PDA培养液中，28℃生化培养箱中诱导处理1-2天；

（4）菌丝收集：收集步骤（3）诱导处理后的菌丝，并除去接种块，用蒸馏水洗涤3-5次，置于60℃烘箱中烘干至恒重；

（5）菌丝三萜提取与检测：取步骤（4）烘干的菌丝用乙醇常温浸提2h后，150W超声0.5h，60℃旋转蒸干，用甲醇溶解定容，并采用香草醛-冰醋酸法检测三萜含量。

本发明的优点及有益之处：在灵芝液体发酵过程中加入钙离子和水杨酸进行诱导，能够显著提高灵芝菌丝中三萜的含量，提高灵芝的质量，而且操作简单成本低。灵芝三萜是灵芝中主要的药理活性成分，通过添加钙离子和水杨酸的诱导，能够有效的提高灵芝液体发酵中三萜的含量，菌丝的三萜含量达48.97 mg/g，比对照组高48.26%。

附图说明

图1为不同培养时间菌丝的三萜含量示意图。图中，横坐标表示培养的天数，纵坐标表示三萜含量mg/g。