[发明专利]一种使用GC-MS法测定茶叶中生物碱的方法

说明书

技术领域

本发明属于茶叶的理化检验技术领域，具体说是一种使用GC-MS法测定茶叶中生 物碱的方法,是涉及茶叶中烟碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、新烟碱和可替宁的测定技术。

背景技术

烟草生物碱是烟草极为重要的一类化学成分。烟碱、降烟碱、假木贼碱、新烟草碱 是主要生物碱,通常称除烟碱之外的其他生物碱为“次要生物碱”。烟草属茄科烟属，可分为 3个亚属，即普通烟草、黄花烟草和碧冬烟草，共14组66种，在同一个种内，烟草主要生物碱 含量相对稳定，但不同种间生物碱含量差异极大。其中，50-60%的种以烟碱为主要生物碱， 烟碱占总生物碱比例在80%以上，包括有栽培利用价值的普通烟草和黄花烟草。30-40%的种 以降烟碱占优势，这些种具有烟碱转甲基酶活性，烟碱在去甲基酶作用下大量转化为降烟 碱，如在拟穗状烟草中，其占总生物碱含量比高达92.7%。假木贼碱在5个种中为主要生物 碱，最高含量比可达86.7%（粉蓝烟草），而新烟草碱通常在每个种中含量都不是绝对高，只 在少数种中含量相对较高。

烟草中含有数十种次要生物碱，如降烟碱、新烟草碱、假木贼碱、麦斯明、可替宁、 2,3’-二吡啶、3,3’-二吡啶、二烯烟碱、N-甲基假木贼碱、二烯降烟碱等，其中降烟碱、新烟 草碱和假木贼碱的含量相对较高，研究也最多。次要生物碱在烟草中广泛分布，但在其它植 物类含量甚少。仅有极少文献报道一些其他茄科类植物中也可能含有次要生物碱，如白夜 丁香（Cestrumdiurnum）不但含有烟碱，还含有降烟碱、可替宁和麦斯明，夜丁香（Cestrum nocturnum）含有烟碱和降烟碱，一些茄科澳洲毒茄属植物也含有烟碱和降烟碱，其中有一 种灌木树叶Duboisiahopwoodii，还被当地土著居民用来制作嚼烟。但其他茄科类植物中 含有的次要生物碱种类与烟草有差异。茶叶作为人们日常生活中的常用食品，对于其中所 含生物碱的测定很有意义，但目前已公开的测定方法很少，曾有文献报道茶叶中有烟碱的 检出，但方法较为繁琐。

《YC/T383-2010烟草及烟草制品烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明和假木贼碱的测 定气相色谱-质谱联用法》针对烟草产品开发了检测方法，但是烟碱在烟草中的含量达到 3%的含量，远远高于茶叶中的含量（20μg/kg），因此该方法不能直接用于茶叶的生物碱含量 检测。

发明内容

本发明的目的正是基于上述现有技术状况，而提供一种使用GC-MS法测定茶叶中 烟碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、新烟碱和可替宁的方法。利用本发明提供的测定方法，能 快速、高效、环保地检测茶叶中烟碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、新烟碱和可替宁的含量。

本发明正是在上述综合文献报道的基础上，建立了茶叶中烟碱及次要生物碱的检 测方法，并应用建立的方法检测了茶叶中烟碱及次要生物碱含量，发现茶叶中不仅有烟碱 的检出，同时也有其他次要生物碱的检出。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种使用GC-MS法测定茶叶中生物碱的方法，包括烟碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、新 烟碱和可替宁的测定，具体包括以下步骤：

1）萃取溶液的配制：配制浓度为0.01%三乙胺的甲基叔丁基醚溶液为萃取溶液，具体配 制方法为：准确移取50ul的三乙胺溶液到500mL的容量瓶中，加入甲基叔丁基醚定容至刻 度，配置成浓度为0.01%三乙胺/甲基叔丁基醚溶液。

2）样品的处理：称取2g茶叶末放入50mL离心管中，然后加入1.0~6.0mL10%的氢 氧化钠溶液,静置10min，取10mL步骤1）所配的萃取溶液到离心管中，并加入200μL的 内标溶液，于旋涡混合器上以2000rpm速度振荡1min；取1.0mL上清液于内含150mg无水 硫酸镁，50mgPSA吸附剂，50mgC18E吸附剂的2mL净化离心管中，于旋涡混合器上以 2000rpm振荡2min，以5000rpm离心3min，取上清液过0.22μm有机相滤膜后，进GC-MS检 测；

所述内标为2-甲基喹啉，内标溶液浓度为800μg/mL，用萃取溶液配制。

3）标准工作溶液制备：

用萃取溶液配制六个不同浓度的均含有200μL内标溶液的烟碱系列标准溶液（因烟碱 会降解为降烟碱和麦斯明，所以要单独配制），浓度范围：1.144-57.2μg/mL，