[发明专利]采用LRS获取白细胞的方法及所获得白细胞在基础实验中的应用

权利要求书

1.一种采用LRS获取白细胞的方法，其特征在于：对经血小板单采术后 的单采血小板白细胞滤器在百级洁净区内进行包括如下步骤所述的操作：

(1)使用D-Hank’s液冲洗单采血小板白细胞滤器上的白细胞过滤装置3～4 次，去除白细胞过滤装置上附着的血渍并将每次冲洗后所得的冲洗液收集在一 起；

(2)继续使用D-Hank’s液冲洗经(1)处理后的单采血小板白细胞滤器上 的白细胞过滤装置2～3次，每次30～35s，去除白细胞过滤装置上粘附的物质并 将每次冲洗后所得的冲洗液收集在一起；

(3)再次使用D-Hank’s液冲洗经(2)处理后的单采血小板白细胞滤器上 的白细胞过滤装置2～3次，将粘附其上的白细胞冲洗脱落，并将每次冲洗后所 得的冲洗液收集在一起；

(4)将(1)、(2)和(3)中收集到的冲洗后所得的冲洗液混合形成混合 液并转移至无菌离心管中，采用D-Hank’s液将上述混合液进行稀释，其中混合 液与D-Hank’s液的质量比为1:18～20；然后采用Ficoll密度梯度离心法按照1:2 进行梯度分离，其中离心速率为1800～1900rpm，离心温度为37～37.5℃，离心 时间为30～35min，离心过程结束后得到离心液体；

(5)用吸管吸取(4)中得到的离心液体的中间白膜层，得到白细胞粗品， 然后采用PBS缓冲液对该白细胞粗品进行洗涤，并采用常温下1200～1300rpm 的转速离心5～6min后，弃去上清液，得到沉淀物；将该沉淀物再次使用PBS 缓冲液进行洗涤离心后，得到的最终沉淀物为存活的白细胞。

2.含有权利要求1所述方法获得的存活的白细胞的试剂盒。

3.通过权利要求1所述的方法获得的白细胞在免疫学、药理学、肿瘤学和 血液学中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：采用单采血小板白细胞滤器 获取的白细胞在过继免疫治疗细胞中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：采用单采血小板白细胞滤器 获取的白细胞的过继免疫治疗细胞在共刺激分子的表达中的应用。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：采用单采血小板白细胞滤器 获取的白细胞在T细胞增殖和经扩增后细胞因子分泌检测中的应用。