[发明专利]单克隆抗体及其应用

说明书

本发明属于抗体药物的技术领域，具体涉及鼠抗人PD‑L1单克隆抗体及其应用。本发明提供的抗体是来源于鼠杂交瘤细胞并经过PD‑L1亲和力筛选的，鼠源抗体对猴PD‑L1或/和人PD‑L1的亲和力和特异性优异，可呈剂量依赖性阻断人PD‑L1与人PD‑1的结合，有效的促进T淋巴细胞增殖，刺激淋巴瘤细胞IL‑2和IFNγ的分泌。同时抗PD‑L1通过阻断PD‑1/PD‑L1信号可以促进肿瘤抗原特异性T细胞的增殖，发挥杀伤肿瘤细胞的作用。阻断PD‑1和PD‑L1信号通路的治疗以其良好的疗效和安全性走在了免疫治疗的前列，成为近两年肺癌治疗领域的热门靶点。

技术领域

本发明涉及抗体药物领域，特别涉及单克隆抗体及其应用。

背景技术

PD-L1：

程序性死亡受体-1(programmed death-1 PD-1)蛋白最初是在凋亡的T细胞杂交瘤中利用削减杂交的方法得到的，由于其和细胞凋亡相关而被命名为程序性死亡-1受体。目前发现的PD-1的配体被证实有两个，分别是PD-L1(又称B7-H1，属于B7超家族)和PD-L2(又称B7-DC)。人PD-L1基因定位于染色体9P24，其开放阅读框编码一个含有290个氨基酸的I型跨膜蛋白，由胞外区IgV、IgC结构域、疏水性跨膜结构域、30个氨基酸片段且带电荷的胞内区组成。人PD-L1的胞外段与B7-1，B7-2具有较高的同源性，且该肽段含有4个明显的半胱氨残基，便于其胞外段的重链和轻链形成二硫键结构。人PD-L1mRNA主要表达于胎盘(特别是合体滋养层和外绒毛状的细胞滋养层)、心脏(鼠中表达较低)、肝脏、肺、肾、骨骼肌等非淋巴组织和少数造血组织(一些骨髓造血细胞以及白血病细胞系)，但在淋巴结和脾脏等淋巴组织的表达量甚微。PD-L1蛋白广泛表达于抗原提呈细胞、活化T、B细胞、巨噬细胞、胎盘滋养层、心肌内皮和胸腺皮质上皮细胞。在许多人类肿瘤组织中均可检测到PD-L1蛋白的表达，且许多肿瘤组织较正常组织中的PD-L1表达水平明显上调。

PD-1/PD-L1参与肿瘤免疫的逃逸机制

肿瘤免疫逃逸的机制包括：肿瘤细胞膜表面相容性复合物(MHC)类分子的表达下调，缺少免疫共刺激分子，分泌免疫抑制性细胞因子，表达死亡配体或表达抑制性配体等^[2]。许多肿瘤细胞系及肿瘤细胞高表达PD-L1分子，其与淋巴细胞表面的PD-1分子结合后，削弱了机体的抗肿瘤免疫应答，从而导致肿瘤免疫逃逸的发生。另外，肿瘤微环境由肿瘤细胞、血管、组织液、间质细胞和少量浸润的淋巴细胞构成。肿瘤微环境还存在一些炎性细胞因子，如IFN-α和IFN-γ等，这些细胞因子可促进肿瘤细胞表面PD-L1的表达，在肿瘤的免疫逃逸过程中发挥了重要作用。

之前的研究认为，肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte，TIL)与肿瘤细胞特异性结合后，可杀伤肿瘤细胞或诱导肿瘤细胞凋亡，从而起到抗肿瘤的作用。但随着研究的深入，人们发现肿瘤细胞高表达PD-L1分子，而TIL细胞高表达PD-1分子。肿瘤细胞表达的PD-L1与TIL表达的PD-1结合后，可抑制TIL细胞的活化并诱导其凋亡，从而抑制机体的抗肿瘤免疫，导致肿瘤免疫逃逸的发生。

治疗性抗PD-L1抗体

PD-L1广泛表达在造血系统和非造血系统肿瘤细胞表面。最初的研究发现，PD-L1主要表达于活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞等，但是随着研究的深入，发现除了淋巴细胞，PD-L1也表达于其他多种组织如胸腺、心脏、胎盘等的内皮细胞，以及胰岛的β细胞等。在临床前的动物实验模型中，用针对PD-1和其配体PD-L1两个靶点的单克隆抗体阻断PD-1通路，能激发细胞毒活性并抑制肿瘤细胞的生长。目前作用于PD-1/PD-L1的这些药物虽然彼此在作用机制上有些许不同，但每个药物都设计为阻断PD-1和它的配体的相互作用，从而使T细胞的“开关”保持在“开”的位置。