[发明专利]同时检测八种猪病相关抗体试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.同时检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪蓝耳病毒、猪 圆环病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流感病毒8种猪病 相关抗体试剂盒，包括：反应卡、酶联试剂、显色剂、终止液、浓缩洗涤 液、样品稀释液，其特征在于，所述反应卡由载片和固定在载片上的包被 有猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、猪 流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流感病毒的8条平行的抗原检测 线和1条由猪IgG划线而成的对照线的硝酸纤维素膜组成，其中每一检测线 和对照线对应于载片反应区中一个彼此分隔的反应槽中，形成独立的检测 区域。

2.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的酶联试剂为 碱性磷酸酶标记的兔抗猪IgG；所述的显色剂为5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸； 所述的终止液为1×磷酸盐缓冲液；所述的浓缩洗涤液为10×磷酸盐缓冲液； 所述的样品稀释液为1×磷酸盐缓冲液。

3.按照权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述反应卡的制备 包括以下步骤：将猪瘟病毒、猪细小病毒，猪伪狂犬病毒、猪蓝耳病毒， 猪圆环病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流感病毒8种猪 病特异性抗原及猪IgG分别划线于硝酸纤维素膜上，包被，封闭，固定载 片，即得。

4.按照权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述猪瘟病毒、猪细 小病毒、猪伪狂犬病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、猪流行性腹泻病毒、 猪传染性胃肠炎病毒、猪流感病毒8种猪病和猪IgG的抗原浓度均为0.1-5.0 ug/ml。

5.按照权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述猪瘟病毒抗原浓 度2.0ug/ml，猪细小病毒抗原浓度1.0ug/ml，猪伪狂犬病毒抗原浓度 4.0ug/ml，猪蓝耳病毒抗原浓度3.0ug/ml，猪圆环病毒抗原浓度1.0ug/ml， 猪流行性腹泻病毒抗原浓度3.0ug/ml，猪传染性胃肠炎病毒抗原浓度 5.0ug/ml，猪流感病毒抗原浓度3.0ug/ml，猪IgG抗原浓度1.0ug/ml。

6.一种应用权利要求1-2所述试剂盒在体外同时检测猪瘟病毒、猪 细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、猪流行性腹泻病毒、 猪传染性胃肠炎病毒、猪流感病毒8种猪病相关抗体的方法，其特征在于， 包括以下步骤：(1)样本前处理：分离血清；(2)加样：稀释血清，加 入到反应卡的每一反应槽，孵育震荡；(3)洗板：样本反应结束后，弃去 反应液，振荡洗涤；(4)加入酶联试剂：向每一反应槽中加入酶联试剂， 孵育震荡，反应结束后洗膜；(5)检测：每一反应槽加入显色液，室温下 反应一段时间后，观察结果；(6)结果判定：a、阳性：在观察孔内，检 测线区(T)及对照线区(C)同时出现紫色线；抗体滴度越高，检测线(T) 颜色越深；b、弱阳性：在观察孔内，检测线区(T)及对照线区(C)同 时出现紫色线，但检测线区(T)出现的颜色很浅；c、阴性：在观察孔内， 只有对照线区(C)出现紫色线；d、失效：在观察孔内，对照线区(C) 和检测线区(T)都不出现紫色线；或仅检测线区(T)出现紫色线。

7.按照权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(2)中所述孵 育震荡是在37℃反应10-50min；优选的，37℃反应30min。

8.按照权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(4)中所述酶 联试剂的稀释倍数为100-500倍；优选的稀释倍数为300倍。

9.按照权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(4)中所述孵 育震荡是在37℃反应10-50min；优选的，37℃反应30min。

10.按照权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(5)中所述的 室温下反应的时间为5-20min；优选的，时间为10min。