[发明专利]一种抗CD6单抗T1h的检测性抗体及应用

说明书

本发明涉及生物制药技术领域，具体地说是涉及一种抗CD6单抗T1h的检测性抗体的获得方法、制备方法及其检测方法；本发明通过全合成噬菌体抗体库的筛选技术，对抗T1h的单链抗体进行生物淘选、对抗T1h噬菌体单链抗体进行阳性克隆鉴定和梯度稀释phage ELISA比较抗T1h单链抗体的亲和力，再对抗T1h全抗体进行制备，获得了一种新的抗T1h的特异性单克隆抗体，该抗体所述抗体重链可变区包含SEQ.1的氨基酸序列，所述抗体轻链可变区包含SEQ.2的氨基酸序列。本发明所述抗体用于临床试验中血液及其他体液中T1h的浓度检测，能够灵敏快速地检测T1h的血药浓度，为T1h临床试验药理、药代分析提供了可靠的研究方法，同时也可以用于中和T1h抗体。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体地说是涉及抗CD6单抗T1h的检测性抗体的获得、制备及其检测方法。

背景技术

CD6是I型整合膜糖蛋白，是清道夫受体富含半胱氨酸超家族SRCRSF(scavengerreceptor cysteine-rich superfamily)的成员，胞外区有3个富含半胱氨酸的功能区SRCR(scavenger receptor cysteine-rich)，其近膜结构域(SRCR3)含有结合ALCAM的位点。CD6主要通过T细胞表达，与人白细胞活化粘附因子ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule，CD166)相互作用；CD6参与T细胞活化，调节T细胞功能和介导细胞—细胞间的粘附。CD6分子可与TCR/CD3形成复合体，参与免疫突触(immunological synapse，IS)的形成；成熟型免疫突触分为中央超级分子活化簇(central supramolecularactivation clusters,C-SMAC)和周边超级分子活化簇(peripheral supramolecularactivation clusters,P-SMAC)两部分，CD6分子是中央超级分子活化簇的重要组成成分之一；免疫突触(IS)的形成是T细胞识别抗原、增殖和活化的关键步骤，是机体细胞免疫反应和体液免疫反应的重要组成部分。自身性免疫性疾病的发病机制中，T细胞增殖活化和迁移过程起着重要作用。基于CD6分子在淋巴细胞成熟、活化和增殖中的重要作用，阻断CD6分子的功能可为类风湿性关节炎、银屑病等自身免疫的治疗提供新的治疗手段或方法。

抗CD6的人源化单抗Itolizumab(T1h)于2013年8月印度获批上市用于慢性斑块型银屑病，该单抗结合于CD6的SRCR1功能域，而不阻碍CD6分子与其配体ALCAM(activatedleukocyte cell adhesion molecule，CD166)的结合；但T1h与细胞表面CD6分子形成的免疫复合物通过内在化机制进入细胞内，被胞内溶酶体系统消化降解，降低淋巴细胞表面CD6水平，阻碍CD6分子与TCR/CD3形成免疫突触(IS)，表现为STAT3,MAPK,AKT信号传导途径磷酸化水平减低，淋巴细胞活化和增殖受抑，显著降低IFN-γ和TNF-α等炎性细胞因子的表达和分泌，从而达到治疗自身免疫性疾病的目的。

抗体库技术为全人源抗体的筛选提供了良好的技术平台，抗体库技术绕过了以往单抗研制过程中必须的杂交瘤过程，甚至不需要经过免疫过程即可获得各种抗体基因及抗体分子片段。噬菌体抗体库是最早出现也是目前应用最广泛的抗体库，噬菌体抗体库通过噬菌体展示技术将不同特异性的抗体或其功能片段(Fab、Fv、ScFv)表达在噬菌体表面，再用抗原进行筛选；噬菌体抗体库根据抗体基因的来源分为免疫库和非免疫库，非免疫库又包括天然库、半合成库和全合成库；噬菌体抗体库的筛选模拟了抗体亲和力成熟的过程，通常将抗原包被在固相介质上，加入待筛选的噬菌体抗体库，通过数轮“吸附-洗涤-洗脱-扩增”的过程(即淘选)直至筛选到高亲和力、特异性强的抗体。