[发明专利]一种基因工程重组蛋白、其制备方法及用途

权利要求书

1.一种生长抑素重组蛋白，该重组蛋白的氨基酸序列见序列表SEQIDNO：1。

2.权利要求1所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白由产肠毒素性大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位和生长抑素结构域及其片段组成，其中大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位位于该重组蛋白的氨基端，生长抑素结构域及其片段位于该重组蛋白的羧基端，所述的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位和生长抑素结构域及其片段任选地使用接头进行连接。

3.编码权利要求1所述的生长抑素的基因序列，其特征在于该编码基因具有序列表SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。

4.权利要求1所述的重组蛋白的制备方法，主要包括以下步骤：

①设计引物SEQIDNO：3和SEQIDNO：4，用PCR方法从产肠毒素性大肠杆菌中克隆大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的编码核苷酸序列，并用分子克隆常规方法，选择合适的酶切位点，将其插入表达载体pET28a的合适位置，其中5'端插入载体pET28a的NcoI酶切位点处，亦即其编码蛋白序列的N端插入载体pET28a的NcoI酶切位点处；

②设计引物SEQIDNO：5和SEQIDNO：6，用PCR方法构建生长抑素的编码核苷酸序列，并用分子克隆常规方法，选择合适的酶切位点，将其插入载体pET28a-大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的合适位置，其中3'端插入载体pET28a-大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的XhoI酶切位点处，亦即其编码的生长抑素的N端插入载体pET28a-大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的XhoI酶切位点处；

③将构建的重组表达载体pET28a-大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位-生长抑素转入E.coliBL21（DE3）菌株中，将重组菌培养至OD600为0.5至1.0时，加入诱导剂IPTG至终浓度为0.1至1.0mmol/L，诱导表达；

④收获表达的重组菌液，离心收集菌体，超声破碎或以其它适宜的方法破碎菌体，高速离心收集包涵体沉淀，再用包涵体变性缓冲液孵育使包涵体溶解；

⑤将溶解的包涵体过镍柱进行亲和层析纯化，收集洗脱峰，再稀释复性或用其它适当的方法复性，透析并浓缩，冷冻保存。

5.权利要求1所述的重组蛋白在促进动物生长中的用途。

6.权利要求1所述的重组蛋白在制备促进动物生长的药物组合物或疫苗中的应用。