[发明专利]高通量检测花生AhFAD2B基因SNP基因分型的引物及方法

权利要求书

1.一种高通量检测花生AhFAD2B基因SNP基因分型的引物，其特征在于，包括：

特异引物，核苷酸序列如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示；

通用引物，核苷酸序列如SEQIDNo.3所示。

2.一种高通量筛选AhFAD2B基因等位变异的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(i)提样品的DNA，经12000g离心后，65℃烘干20～35min，制得基因组DNA；

(ii)以步骤(i)制得的基因组DNA为模板，配制含有FAM淬灭基团和HEX淬灭基团的PCR反应体系，进行PCR扩增，检测荧光强度，读取数据；引物的核苷酸序列如SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3所示；

(iii)对步骤(ii)的数据进行分析，当检测到仅有FAM探针的荧光时，则第442位为A碱基缺失纯合，即野生基因型，记为BB；当检测到仅有HEX探针的荧光时，则第442位A碱基插入纯合，即突变基因型，记为bb；当检测到有FAM探针和HEX探针的荧光时，则第442位为杂合子，记为Bb。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(ii)中，含有FAM淬灭基团和HEX淬灭基团的PCR反应体系由LGC公司销售的含有FAM淬灭基团和HEX淬灭基团的MasterMix、基因组DNA和引物组成。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(ii)中的PCR反应体系为1μL，组分如下：

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(ii)中，PCR扩增反应条件如下：

94℃预变性15min；

第一步扩增反应，94℃变性20s，61℃～55℃退火，61℃～55℃延伸60s，10个TouchDown循环，每个循环降低0.6℃；

第二步扩增反应，94℃变性20s，55℃退火，55℃延伸60s，26个循环。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(ii)中，检测荧光强度的温度为40℃以下。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(ii)中，数据读取使用LGC公司SNPviewer软件进行。

8.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(iii)中，结果分析使用LGC公司SNPviewer软件进行。