[发明专利]一种鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的方法

权利要求书

1.一种鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：

(1)蜂蜜中总蛋白的提取：分别称取中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜，各放于离心管中，各加无菌 水，震荡混匀，离心机4℃条件下8000g/min离心，吸取上清液至新的离心管中，将上清液 置于4℃冰箱预冷，加入无水乙醇，在冰水浴中温和搅拌，然后在4℃条件下离心，弃去上清 液，沉淀加无菌水，搅拌混匀，后分装到离心管中置于-80℃冰箱备用，来自不同蜂种的蜂蜜 用不同标识标记；

(2)样品蛋白浓度测定：用蛋白浓度测定试剂盒测定样品蛋白浓度；

(3)蛋白样品的处理：分别取中蜂蜂蜜蛋白样品和意蜂蜂蜜蛋白样品于离心管中，各加 入蛋白上样缓冲液，震荡混匀后95℃恒温金属浴变性10分钟；

(4)聚丙烯酰胺凝胶的制备：采用的分离胶浓度为12％，浓缩胶为5％，胶条厚度1.5mm；

(5)蜂蜜蛋白样的电泳：采用蛋白电泳分离系统，两种蛋白上样量均为200μg，初始电 压为90V，蛋白进入分离胶后改为150V至电泳结束，并加入蛋白Marker以指示蛋白分子量 大小；

(6)胶条的处理：电泳结束后胶条放入固定液中固定1小时，中间更换一次固定液，固 定完成后用考马斯亮蓝R-250染液染色3小时，然后置于脱色摇床上脱色至条带清晰；

(7)目标蛋白条带的识别：中蜂蜂蜜蛋白在15.0KDa、意蜂蜂蜜蛋白在16.5KDa有特 异性条带，根据标准蛋白Marker指示，比对蜂蜜蛋白条带结果，达到鉴别目的。

2.根据权利要求1所述的一种鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的方法，其特征在于，步骤(1) 中加入无水乙醇事先在-20℃冰柜预冷。

3.根据权利要求1所述的一种鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的方法，其特征在于，步骤(3) 中蛋白上样缓冲液为SDS-PAGE蛋白上样缓冲液5X。

4.权利要求1所述的方法在中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的鉴别中应用。