[发明专利]一种耐热保护剂、禽用耐热保护剂活疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及一种耐热保护剂、禽用耐热保护剂活疫苗及其制备方法，属于生物技术领域。本发明的一种耐热保护剂，组分包括蔗糖10～15%、聚乙烯吡咯烷酮2～4%、芦布若尔1～5%、PEG8000 0.1～2%、聚赖氨酸1～4%、L‑半胱氨酸1～4%、L‑组氨酸1～2%、甘氨酸1～2%，余量为水；将半成品病毒液与耐热保护剂混合，冷冻干燥，制成禽用耐热保护剂活疫苗。本发明通过添加耐热保护剂，降低了病毒在冷冻和真空干燥过程中损伤，提高了产品在保存和使用中的稳定性；本发明方法制备的禽用耐热保护剂活疫苗，实现了储运过程中冷藏保存，保存期延长到2～8℃保存36个月。

技术领域

本发明涉及一种耐热保护剂、禽用耐热保护剂活疫苗及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

冷冻干燥技术是生物学领域的一个重要储藏技术，广泛地应用于动物用生物制品的研发和生产中，以保持细菌、病毒和抗体等的生物活性，延长产品的有效期。冻干保护技术是动物用活疫苗生产中的关键技术，对于疫苗的保存、运输和使用具有很大的影响。

影响冻干保护剂保护性能的因素主要来自两方面：一是微生物因素，微生物的种类差异（如是否为有囊膜病毒）、培养方式以及疫苗的种类等；二是保护剂的配方，选用保护剂的原料性质、配比和疫苗冻干曲线等。病毒对热、酸敏感，在存放和运输过程中容易受到环境中温度和酸碱度的影响较大，因此需要选择一种合适的冻干保护剂，能够在不同保存条件下有效的避免病毒遭受破坏，保持病毒活性，以延长病毒的存放时间。

但是目前国内禽用活疫苗产品仍然以常规疫苗（冷冻保存）为主，禽用耐热保护剂活疫苗（冷藏保存）市场占有率远低于10%，而且现有耐热保护剂活疫苗还存在生产成本较高、保护性能不尽理想等问题。因此，研发一种适于大规模生产、保护功能强的禽用活疫苗耐热冻干保护技术显得尤为重要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服已有技术之缺陷，提供一种耐热保护剂、禽用耐热保护剂活疫苗及其制备方法，应用耐热保护剂的活疫苗具有耐热性能好、保护功能强的特点。

本发明所述技术问题是以下述技术方案实现的：

一种耐热保护剂，是由以质量体积百分含量计的下列组分制成：

蔗糖10～15%，聚乙烯吡咯烷酮2～4%，芦布若尔1～5%，PEG8000 0.1～2%，聚赖氨酸1～4%，L-半胱氨酸1～4%，L-组氨酸1～2%，甘氨酸1～2%，余量为水。

上述耐热保护剂，所述耐热保护剂包括保护剂A和保护剂B，所述保护剂A是将蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮和芦布若尔溶解于水中，除菌后备用；所述保护剂B是将PEG8000、聚赖氨酸、L-半胱氨酸、L-组氨酸和甘氨酸溶解于水中，除菌后备用。

一种禽用耐热保护剂活疫苗的制备方法，使用如上述耐热保护剂，并按以下步骤制备：

a. 病毒储存液制备：将禽用活疫苗半成品病毒液与部分保护剂B按照体积比10：2～10：5充分混匀，制成病毒储存液，置-15℃以下保存；

b.疫苗制备：将病毒储存液室温放置，至完全融化，然后按半成品病毒液与耐热保护剂体积比1：1加入保护剂A和剩余的保护剂B，充分混匀后，定量分装，冷冻干燥，制成禽用耐热保护剂活疫苗。

一种禽用耐热保护剂活疫苗，它按照上述方法生产的禽用耐热保护剂活疫苗。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明在半成品病毒液储存时加入保护剂，有效延长半成品的保存期，保证半成品病毒在常温状态下生物活性的维持，实现了常温直接融化疫苗半成品，生产工序更简化，且降低了能耗。

在耐热保护剂中添加表面活性剂芦布若尔、氨基酸聚合物聚赖氨酸，并与PEG8000、聚乙烯吡咯烷酮等最适配比，降低了病毒在冷冻和真空干燥过程中的损伤，且提高了产品在保存和使用中的稳定性。