[发明专利]一种耐热保护剂、猪瘟耐热保护剂活疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种耐热保护剂、猪瘟耐热保护剂活疫苗及其制备方法，属于生物技术领域。一种耐热保护剂，组方成分包括蔗糖10～15%，聚乙烯吡咯烷酮2～6%，聚赖氨酸2～4%，酶解明胶0.5～3%，柠檬酸钠0.2～1%，硫脲2～10%，牛血清白蛋白2～6%，芦布若尔1～4%，余量为水；将半成品病毒液与耐热保护剂混合，冷冻干燥，制成猪瘟耐热保护剂活疫苗。本发明通过添加耐热保护剂，降低了病毒在冷冻和真空干燥过程中损伤，提高了产品在保存和使用中的稳定性；本发明方法制备的猪瘟耐热保护剂活疫苗，实现了储运过程中冷藏保存，保存期延长到2～8℃保存36个月。

技术领域

本发明涉及一种耐热保护剂、猪瘟耐热保护剂活疫苗及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

猪瘟俗称烂肠瘟，是一种具有高度传染性的疫病，其特征是急性呈败血性变化，实质器官出血，坏死和梗死；慢性呈纤维素性坏死性肠炎。猪瘟是威胁养猪业的主要传染病之一，一年四季都可发生，常给养猪业造成毁灭性损失，预防猪瘟最有效的方法就是接种猪瘟疫苗。

市场上常用的猪瘟疫苗主要有两种：猪瘟细胞苗和猪瘟脾淋苗。这两种疫苗在储运时均需在-15℃的条件下冷冻保存，在使用的终端很难达到保存条件的要求，疫苗容易失活，造成免疫效果参差不齐，从而引起免疫失败导致疫病爆发。其中猪瘟脾淋苗还存在高温季节生产技术难度大、半成品保存期短（-15℃以下保存仅有15日）和溶解不佳等问题。因此，研发一种半成品保存期长、保护功能强的猪瘟活疫苗耐热冻干保护技术显得尤为重要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服已有技术之缺陷，提供一种耐热保护剂、猪瘟耐热保护剂活疫苗及其制备方法，添加耐热保护剂的猪瘟活疫苗具有耐热性能好、保护功能强的特点。

本发明的目的通过以下技术方案实现的：

一种耐热保护剂，是由以质量体积百分含量计的下列组分制成：

蔗糖10～15%，聚乙烯吡咯烷酮2～6%，聚赖氨酸2～4%，酶解明胶0.5～3%，柠檬酸钠0.2～1%，硫脲2～10%，牛血清白蛋白2～6%，芦布若尔1～4%，余量为水。

上述耐热保护剂，所述耐热保护剂分为保护剂A和保护剂B，所述保护剂A是将蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、酶解明胶和芦布若尔溶解于水中，除菌后备用；所述保护剂B是将聚赖氨酸、柠檬酸钠、硫脲、牛血清白蛋白溶解于水中，除菌后备用。

一种猪瘟耐热保护剂活疫苗的制备方法，使用如上述的耐热保护剂，并按以下步骤制备：

a.病毒储存液制备：将新鲜的制苗用脾淋组织半成品在2～10℃下捣碎至匀浆，用稀释液稀释匀浆，匀浆与稀释液的质量体积比为1：1，将稀释的匀浆与部分保护剂B按体积比4：1～4：2混合，混合液于2～8℃的条件下放置分层，下层液体为病毒储存液，将病毒储存液分装，置-15℃以下保存；

b.疫苗制备：将病毒储存液室温放置，至完全融化，用稀释液将病毒储存液稀释1～4倍，然后按稀释的病毒液与耐热保护剂体积比1：1加入保护剂A和剩余的保护剂B，充分混匀，定量分装，冷冻干燥，制成猪瘟耐热保护剂活疫苗。

一种猪瘟耐热保护剂活疫苗的制备方法，使用如上述的耐热保护剂，并按以下步骤制备：

a.病毒储存液制备：将猪瘟细胞毒半成品病毒液与部分保护剂B按体积比4：1～4：2混合，制成病毒储存液，置-15℃以下保存；

b.疫苗制备：将病毒储存液室温放置，至完全融化，用稀释液将病毒储存液稀释至10万～100万RID/ml，然后按稀释的病毒液与耐热保护剂体积比1：1加入保护剂A和剩余的保护剂B，充分混匀后，进行定量分装，冷冻干燥，制成猪瘟耐热保护剂活疫苗。

上述猪瘟耐热保护剂活疫苗的制备方法，所述稀释液为乳汉液、汉克氏液或PBS液。